當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 丙二醛(MDA)測試盒微量法
貨號 | BJ-0161153-1 |
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商品介紹:
測定意義: 氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。 測定原理: MDA與硫代巴bi妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm有最大吸收峰,進(jìn)行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
丙二醛(MDA)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-0161153-1 |
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。
一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
裝配銜接蛋白180抗體葉球鞘氨單胞菌RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.5100mL
液泡蛋白分選受體SORCS抗體類肺炎克雷伯氏菌類肺炎亞種Oligo(dT) 纖維su25mg
滑膜肉瘤X染色體相關(guān)2抗體松口蘑RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5100mL
突觸相關(guān)蛋白102抗體速生桿菌柱式鼠尾 DNAout50 次規(guī)格
PSD95結(jié)合蛋白3抗體大豆慢生根瘤菌百萬基級細(xì)菌 (G+)DNAout10 次
肺表面活性蛋白C抗體枯草芽胞桿菌枯草亞種RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.0100mL
5-羥色受體1D抗體大豆慢生根瘤菌RNA 級 Oligo(dT) 纖維su25mg
5-羥色受體1E抗體稀褶黑菇RNA 級 Guanidium HCl ( 鹽酸胍 )100g
5-羥色受體1F抗體平菇磁珠植物 DNAout50 次規(guī)格
5-羥色受體2A抗體兩歧雙歧桿菌柱式血液 DNAout200 次規(guī)格
5-羥色受體2B抗體立枯絲核菌柱式糞便 DNAout50 次
5-羥色受體3A抗體短波單胞菌屬柱式凋亡 DNAout50 次規(guī)格
5-羥色受體3D+3E抗體釀酒酵母柱式醬油 DNAout10 次
5-羥色受體3D抗體釀酒酵母M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout50 次
5-羥色受體4抗體墳?zāi)构?jié)桿菌液體樣品 DNAout50 次
丙二醛(MDA)測試盒微量法生長分化因子11(GDF11)試劑盒Anti-FABP2 AntibodyRad52
膜橋蛋白(Ponticulin)試劑盒 Anti-FABP1 Antibody(PB0644)環(huán)指蛋白150
血管緊張suII (ANG II)試劑盒 Anti-FABP2 AntibodyT特異性趨化因子
蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)試劑盒Anti-FABP2 Antibody晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體
電子轉(zhuǎn)移黃su蛋白β肽(ETFβ)試劑盒 Anti-FABP2 Antibody環(huán)指蛋白12
胎盤性磷酸酶(PLAP/ALPP)試劑盒 Anti-FABP2 Antibody環(huán)指蛋白113B
胃蛋白mei(PP)試劑盒Anti-FABP2 Antibody環(huán)指蛋白165
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