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貨號(hào)	BJ-0161151-1

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱：線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測(cè)試盒熒光法
規(guī)格：100管/96樣
貨號(hào)：BJ-0161151-1

檢測(cè)方法：熒光法

產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個(gè)月

商品介紹：

測(cè)定意義：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機(jī)體95％以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時(shí)，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測(cè)活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測(cè)定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)了利用熒光法直接定量檢測(cè)線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

操作步驟:

本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

促黃體激su誘導(dǎo)蛋白5抗體山性膠電泳液 ,10×250mL規(guī)格

T淋巴激活蛋白抗體大腸埃希菌去離子甲酰100mL

磷酸化S6核糖體蛋白抗體盤多毛孢屬溴化乙錠清除劑100 次規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體食砜節(jié)桿菌dNTP 溶液（標(biāo)記）0.5mL規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體松生莖點(diǎn)霉硫酸葡聚糖1g規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體煙管菌一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝30 次

糖皮質(zhì)激su調(diào)節(jié)激酶1抗體大腸埃希氏菌超快核酸電泳液干粉 50L

磷酸化磷酯酶Cβ3抗體果生鏈核盤菌miRNA 尿su -PAGE 上樣液 ,6×10mL

磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體大腸埃希氏菌(大腸桿菌)DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) （100-600 bp）50 次規(guī)格

依賴鈉鈣交換蛋白6抗體弗氏假絲酵母4mL DNA 離心超濾管（90-150 KD）1個(gè)

相關(guān)抗原17抗體耶特鏈霉菌Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM25μL

磷酸化多配體聚糖4(Ser179)抗體根瘤菌屬一站式 DNA 尿su -PAGE 電泳套裝30 次

基質(zhì)衍生因子1抗體糖化酵母TAE 電泳液 ,50×2500mL

SET結(jié)合蛋白1抗體類干酪乳桿菌RNA 電泳液 ,10×100mL

生長(zhǎng)抑su受體3抗體扶桑本森頓酵母TBE 電泳液 ,10×250mL
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測(cè)試盒熒光法肌球蛋白重鏈9(MYH9)試劑盒 Anti-EYA4 Antibody磷酸化核糖體S6激酶RSK2

Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒 Anti-EXO1 Antibody磷酸化核糖體S6激酶RSK2

多巴受體D3(D3R/DRD3)試劑盒Anti-ETV6 Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒Anti-EWSR1 Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

肝配蛋白A1 (EFNA1)試劑盒Anti-EVA1A Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

金屬硫蛋白3 (MT3)試劑盒Anti-EZH2 Antibody磷酸化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1

雌受體β(ERβ)試劑盒 Anti-F2 Antibody磷酸化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1
特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速