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淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法

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產(chǎn)品型號

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所  在  地上海市

更新時間:2022-08-17 20:26:56瀏覽次數(shù):107次

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貨號 BJ-01611213-1
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18797-79-0標(biāo)準(zhǔn)品
甲氧基香豆:531-59-9
香葉CA

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產(chǎn)品簡介:

產(chǎn)品名稱:淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法
規(guī)格:100管/96樣
貨號:BJ-01611213-1

檢測方法:微量法

產(chǎn)品分類:脂肪酸代謝系列

貯存溫度:2~8℃。

本試劑盒保質(zhì)期:6個月

商品介紹:

測定意義:

淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代謝過程的可逆反應(yīng)酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質(zhì)體中,負(fù)責(zé)延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,負(fù)責(zé)葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過程中的關(guān)鍵酶。

在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機(jī)磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級,一般認(rèn)為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機(jī)磷反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH,使340nm下吸光值增加。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

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特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速

 


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