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歸納影響pcr特異性的參考因素

時間:2023/2/14閱讀:629
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許多因素可以影響pcr的特異性,在此我們作一歸納,供大家參考:

1、退火步驟的嚴格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。

2、減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。

3、引物二聚體是最常見的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。

4、改變mgcl2(有時kcl)濃度可以改進特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴格性或者對taq酶的直接作用。

一般認為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測,有些最好于當(dāng)日電泳檢測,大于48h后帶型就會出現(xiàn)不規(guī)則,甚至消失。


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