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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>?細(xì)胞STR鑒定方法
要求能提供細(xì)胞的一般和特殊的生物學(xué)性狀指標(biāo)。一般特性指標(biāo)包括:細(xì)胞的一般形態(tài)、特異性結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、接種率、染色體分析、同工酶檢查、DNA指紋圖譜等。特異性指標(biāo)常依據(jù)細(xì)胞種類和功能的特異性進(jìn)行鑒定,比如,若為腺細(xì)胞則一般鑒定是否有特殊產(chǎn)物包括分泌蛋白或激素產(chǎn)生;若為腫瘤細(xì)胞,還應(yīng)能夠證明細(xì)胞確系來(lái)源于腫瘤組織而非其它,并仍保留有腫瘤組織的特性,為此常需做集落形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)以及對(duì)正常組織的侵襲實(shí)驗(yàn)等。
一、對(duì)正常細(xì)胞系的鑒定
對(duì)正常細(xì)胞系的鑒定主要圍繞以下四個(gè)方面進(jìn)行:
(1)鑒定細(xì)胞的種系來(lái)源:常用方法主要有染色體分析、同工酶分析、DNA指紋圖譜等技術(shù)。(2)鑒定細(xì)胞的組織來(lái)源:可通過(guò)形態(tài)學(xué)手段、檢測(cè)組織特異性抗原等進(jìn)行鑒定。
(3)細(xì)胞是否發(fā)生轉(zhuǎn)化和惡變:主要通過(guò)核型分析、細(xì)胞生長(zhǎng)行為觀察(是否喪失接觸抑制)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行鑒定。
(4)細(xì)胞有無(wú)發(fā)生交叉污染,主要通過(guò)同工酶及DNA指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行鑒定。
二、對(duì)腫瘤細(xì)胞系的鑒定
對(duì)腫瘤細(xì)胞系的鑒定主要圍繞其惡型性展開(kāi),染色體的異常、接觸抑制和密度依賴生長(zhǎng)特性的改變、集落形成能力、裸鼠成瘤、動(dòng)物體內(nèi)的侵襲生長(zhǎng),以及某些基因、分子水平的特征均是腫瘤細(xì)胞鑒定的方向。
細(xì)胞STR鑒定的意義:
由于細(xì)胞培養(yǎng)體系在生物藥物的研究和技術(shù)發(fā)展中非常重要,適當(dāng)?shù)募?xì)胞系鑒定過(guò)程即成為每個(gè)研究人員的大興趣點(diǎn)。然而,交叉污染的問(wèn)題仍然存在。隨著世界范圍內(nèi)實(shí)驗(yàn)室使用新細(xì)胞系的數(shù)量增多和頻率增加,在質(zhì)量控制(如:細(xì)胞系鑒定)的基本原則上產(chǎn)生了巨大的差別。從已經(jīng)發(fā)表的、使用"錯(cuò)誤"的細(xì)胞系而導(dǎo)致可疑性結(jié)果的研究論文,到用于臨床的干細(xì)胞系和其它細(xì)胞系,交叉污染影響到了科學(xué)研究的每個(gè)領(lǐng)域-從實(shí)驗(yàn)臺(tái)到臨床。如果在細(xì)胞培養(yǎng)的處理和操作中不進(jìn)行重大變革,那么交叉污染將會(huì)成為一個(gè)更大、更嚴(yán)重的問(wèn)題。
細(xì)胞培養(yǎng)體系在生物研究和藥物研究發(fā)展中非常重要,隨著研究的深入,細(xì)胞系的種類也逐漸增多,而細(xì)胞系的交叉污染仍然存在。交叉污染給實(shí)驗(yàn)研究帶來(lái)了很嚴(yán)重的問(wèn)題,如果使用了錯(cuò)誤的細(xì)胞系使研究的結(jié)果遭到質(zhì)疑,前期的實(shí)驗(yàn)可能都要重新來(lái)做。因此對(duì)細(xì)胞系的認(rèn)證是有必要的
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