2XRAPA3G全能PCR Mix-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	A-PJ1031	分類	PCR相關(guān)
規(guī)格	1ml、10ml	品牌	撫生

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

產(chǎn)品介紹：

2XRAPA3G全能PCR Mix

RAPA3G DNA聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代Taq DNA聚合酶，第三代DNA聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產(chǎn)量等特征，從而使得RAPA3G系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴增，無需核酸純化步驟。雜質(zhì)耐受性方面，該酶可耐受植物中的多糖多酚；全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂；乙醇；胍鹽；SDS等強PCR抑制劑。在血液直擴PCR實驗中，RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現(xiàn)出同等的表現(xiàn)，其性能表現(xiàn)優(yōu)于二代聚合酶（血液擴增Hemo KlenTaq Mix）。在植物直擴PCR實驗中，RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。
長片段擴增能力方面，使用該酶可輕松擴增8kb的基因組片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴增速度，可顯著的縮短PCR的擴增時間，在常規(guī)測試條件下，10s的延伸時間可完成1kb的基因組DNA擴增。在PCR擴增成功率方面，與其它類型的PCR擴增試劑對比中，RAPA3G PCR Mix表現(xiàn)出的PCR擴增成功率。此外，該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經(jīng)藍白斑測試，其保真性能約為Taq DNA聚合酶的56倍）。另外，RAPA3G系列產(chǎn)品均采用專有的熱啟動技術(shù)，確保50°C以下無活性，僅有95°C加熱5min以后才能恢復(fù)其活性，因此可最大限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。該PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性，產(chǎn)物部分帶有"A"尾巴，部分為平末端，因此產(chǎn)物均可用于TA克隆或平端克隆。

特征和用途

快速擴增：具有6kb/min的擴增能力，1kb片段可在25min內(nèi)完成擴增.
高成功率擴增：RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR擴增成功率。
液體樣品直接擴增：全血、血清、培養(yǎng)細(xì)胞、尿液等樣本直接進行PCR擴增，無需核酸純化。
組織樣本直接擴增：葉片、種子、果實、動物組織等樣品，可以直接擴增，也可采用DNA釋放劑簡單處理后直接擴增，無需核酸純化。
長片段擴增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb，基因組可以有效擴增>8 kb，cDNA可以有效擴增>8kb。
高保真擴增：保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
高特異性：采用專有熱啟動技術(shù)，50°C以下無活性，僅有95°C加熱5min才能恢復(fù)酶活。

RAPA3G DNA聚合酶對抑制物耐受性

SDS	0.01%	胍鹽	0.25%
乙醇	5%	全血	15%
肝素	0.1IU/ml	血清	15%
Trizol	0.5%	血漿	2%
血紅蛋白	30μM	尿液	5%

50μl體積建議添加的樣品量

抗凝全血	2.5 μl	培養(yǎng)細(xì)胞	>100個
血清	2.5 μl	組織	0.1mg
尿液	2.5 μl	毛發(fā)囊	1-3個
血漿	1 μl	gDNA	1-400ng
植物葉片	2mm	cDNA	1-400ng
植物粗提物	2-4 μl	質(zhì)粒	0.1-10ng

儲存

長期儲存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存，一經(jīng)融化后請放置于4°C，勿再凍存。

反應(yīng)實例

1. 模板適應(yīng)性強，長片段和短片段都可有效擴增

Lane 1：λDNA 500bp, 2：λDNA 1kb, 3：λDNA 2kb, 4：λDNA 5kb, 5：λDNA 8kb, 6：λDNA 15kb, 7：λDNA 20kb, 8：human 500bp ,9：human 1kb, 10：human 2kb ,11：human 5kb, 12：human 8kb, 13：cDNA 166bp, 14：cDNA 552bp, 15：cDNA 960bp, 16：cDNA 1574bp, 17：cDNA 1705bp, 18：cDNA 2755b,p 19：cDNA 4128bp, 20：cDNA 7600bp, M：DNA Marker 10000

選取三種DNA模板，使用RAPA3G PCR Mix進行擴增，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，對于不同種類DNA模板和不同長度的靶基因，RAPA3G PCR Mix均有良好的擴增性能。

2. 對于粗制樣品DNA具有的耐受性

分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板，使用RAPA3G PCR Mix進行PCR擴增，結(jié)果如上圖展示，各種粗制樣品都有良好的擴增，其中全血和血清可耐受15%。

3.擴增靈敏度高，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增

以λDNA為模板，選取不同模板使用量，采用RAPA3G PCR Mix進行擴增2kb靶基因，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增

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