當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>PCR相關試劑>>核酸純化專題>> 20min全能基因組DNA提取試劑盒
貨號 | A-PJ1168 | 分類 | 核酸純化專題 |
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規(guī)格 | 50T | 品牌 | 撫生 |
公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產品介紹:
20min全能基因組DNA提取試劑盒該試劑盒采用裂解液,可快速可靠的從動物組織、細胞、細菌、病毒、全血、血清、血漿、體液、病毒液、棉拭孖等樣品中純化出高純度的 DNA??芍苯佑糜谙拗菩悦盖蟹磻?、PCR、文庫構建、Southern 雜交等多種分子生物學實驗。
操作方法:
(一)RNA 含量較高的動物組織、細胞、細菌樣本的提取方法
(1) 樣品組織懸液的制備:動物組織用研缽研磨:將動物組織研磨粉碎,并取 40~60 mg 加入到 1.5ml EP 管中,加入 280 μl 無菌水,漩渦震蕩 10s混合均勻,打開管蓋加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA,漩渦震蕩 10s 混合均勻,室溫消化 5min,以去除RNA。動物組織用鋼珠研磨:取 50~80 mg 組織加入到 400 μl 無菌水,在研磨儀上研磨 1min。在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的Buffer AP4 裂解液,并在管蓋上加入 5 μl 的 RnaseA,取 280 μl 研磨好的組織懸液到 1.5 ml EP 管中,漩渦 10s 混合均勻,室溫消化 5min,以去除 RNA。懸浮的細胞(104~108 個)或細菌(106~1011 個):在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液,并在管蓋上加入5 μl 的 Rnase A,直接吸取 280 μl 樣品到上述 EP 管中,漩渦震蕩 10s 混合均勻,室溫消化 5min,以去除 RNA。細胞或細菌沉淀:可用 280 μl 無菌水重懸細胞和細菌沉淀,并加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA,漩渦震蕩 10s 混合均勻,室溫消化 5min,以去除 RNA。
(2)RNA 消化完畢后,向上述溶液中加入 20 μl 的蛋白酶 K,漩渦 10s 混合均勻,并置于 56℃水浴鍋(或室溫條件下)中消化 5min。
(3)消化完畢后,向上述溶液中加入 500 μl 的 Buffer LB5,漩渦混合 15s 后,13000rpm 最高轉速離心 2min。將上清液倒入到吸附柱中。
(4)13000rpm 離心 1min,棄過柱液。向吸附柱中加入 500 μl 的 Washing Buffer,13000rpm 離心 15s。棄過柱液,并重復此步驟一次。
(5)將吸附柱重新放回離心機,13000rpm 空離心 2min,將殘留的乙醇甩干。
(6)將吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer,室溫放置 1min,13,000rpm離心 2min,洗脫液即為基因組 DNA,冷凍保存。
(二)RNA 含量較低的樣本(全血、血清、血漿、體液、病毒液、棉拭孖浸泡液等)的提取方法在 1.5 ml EP 管底部預先加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液,在管蓋上加入 20 μl 的蛋白酶 K,直接吸取 280 μl 的液體樣本到 Buffer AP4 裂解液中。上下顛倒,并漩渦混合 10s,使得樣品、Buffer AP4 裂解液、蛋白酶 K 混合均勻,并置于 56℃水浴鍋中(或室溫)消化 5min。按照上述步驟(3)-(6)進行上柱、漂洗、洗脫操作。
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