MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	A01X1078	規(guī)格	1×106
英文名稱	MEF細(xì)胞	產(chǎn)品分類	小鼠細(xì)胞系
實(shí)驗(yàn)類型	D/F12+10%FBS+1%P/S (非永生化)	報(bào)告	提供免疫熒光鑒定報(bào)告

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

名稱	MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14) (種屬鑒定正確)
別稱	MC3T3-E1 SUBCLONE 14
種屬	小鼠
生長特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基	MEMα＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
推薦傳代比例	1:3-1:4
推薦換液頻率	2~3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

背景描述	從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆，從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗壞血酸和3-4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。它們10天后形成一個(gè)礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化，不形成ECM，可以作為MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的陰性對(duì)照。礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨鈣素(OCN)和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細(xì)胞只是產(chǎn)生纖維組織。這些細(xì)胞系是研究體外成骨細(xì)胞分化的好模型，尤其是ECM信號(hào)。它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細(xì)胞的行為類似。
年齡（性別）	新生
組織來源	顱頂骨
細(xì)胞類型	自發(fā)永生化細(xì)胞
生物安全等級(jí)	1
致瘤性	Yes, in immunodeficient mice (forms bone-like ossicles).
基因表達(dá)情況	collagen
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CRL-2594

細(xì)胞傳代：

1. MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。

8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

基質(zhì)金屬蛋白mei2封閉多肽	傳染性肌肉壞死病病毒PCR檢測試劑盒說明書
漢扎洛瓦病毒RT-PCR試劑盒	甘丙肽受體3ELISA試劑盒
人催乳su誘導(dǎo)蛋白(PIP)試劑盒ELISA	副腫瘤性天皰瘡ELISA試劑盒
人5羥二十碳四烯suan(5-HETE)試劑盒ELISA	上皮細(xì)胞黏附分子ELISA試劑盒
人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)ELISA檢測試劑盒	封閉蛋白9ELISA試劑盒
人F-肌動(dòng)蛋白(F-actin)ELISA試劑盒	轉(zhuǎn)換蛋白2ELISA試劑盒
細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白20封閉多肽	嗜人錐蠅PCR試劑盒
活化轉(zhuǎn)錄因子6β封閉多肽	貓支原體（MF）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）
DRIM蛋白封閉多肽	山羊皰疹病毒2型PCR試劑盒
長波長敏感的視蛋白封閉多肽	甲型流感病毒H1亞型(IAV-H1)核suan檢測試劑盒
E1A激活基因刺激蛋白2封閉多肽	佩氏著色霉PCR檢測試劑盒
諾如病毒蛋白封閉多肽	MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞蒙得維的沙門氏菌PCR檢測試劑盒
磷suan化白細(xì)胞介su13受體α1封閉多肽	玫瑰花探針法PCR鑒定試劑盒
5號(hào)染色體開放閱讀框48封閉多肽	炮姜探針法PCR鑒定試劑盒
非受體酪氨suan蛋白激mei2封閉多肽	諾如病毒G1型RT-PCR試劑盒

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。