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蛋白質(zhì)之間相互作用的研究方法有哪些

時(shí)間:2018/11/20閱讀:235
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研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)方法主要包括:a、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn); b、DNase 1 足跡實(shí)驗(yàn);c、甲基化干擾實(shí)驗(yàn); d、體內(nèi)足跡實(shí)驗(yàn); f、拉下實(shí)驗(yàn)。研究蛋白質(zhì)/ 核酸相互作用近期采用的新技術(shù)有:核酸適體技術(shù)、生物信息學(xué)方法、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)以及納米技術(shù)等。

蛋白(綠色熒光蛋白或紅色熒光蛋白)的載體中,共轉(zhuǎn)染到功能細(xì)胞中(一般選用 COS7 細(xì)胞)表達(dá)帶有熒光的融合蛋白.            這樣,相互作用的兩種蛋白就被標(biāo)上不同的熒光,可以在細(xì)胞內(nèi)用熒光顯微鏡直接觀測(cè).在進(jìn)行細(xì)胞定位或共定位時(shí),必須用共聚焦熒光顯微鏡觀測(cè).因?yàn)楣簿劢篃晒怙@微鏡(相當(dāng)于醫(yī)院給病人診斷的 CT)觀測(cè)的是細(xì)胞內(nèi)一個(gè)切面上的顏色.如果在一個(gè)切面上在同一區(qū)域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區(qū)域內(nèi)有相互作用.普通熒光顯微鏡看到的是一個(gè)立體圖象,    無法確定蛋白質(zhì)共定位現(xiàn)象.在進(jìn)行定位或共定位同時(shí),也可以對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色.     這樣,在細(xì)胞中就有三種顏色.細(xì)胞核的顯色幫助你確定共定位發(fā)生的位置.上面介紹的活細(xì)胞定位,其優(yōu)點(diǎn)是表達(dá)的熒光蛋白熒光強(qiáng),沒有背景,觀測(cè)方便.

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