研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的實驗方法主要包括:a、凝膠阻滯實驗; b、DNase 1 足跡實驗;c、甲基化干擾實驗; d、體內(nèi)足跡實驗; f、拉下實驗。研究蛋白質(zhì)/ 核酸相互作用近期采用的新技術有:核酸適體技術、生物信息學方法、蛋白質(zhì)芯片技術以及納米技術等。
蛋白(綠色熒光蛋白或紅色熒光蛋白)的載體中,共轉(zhuǎn)染到功能細胞中(一般選用 COS7 細胞)表達帶有熒光的融合蛋白. 這樣,相互作用的兩種蛋白就被標上不同的熒光,可以在細胞內(nèi)用熒光顯微鏡直接觀測.在進行細胞定位或共定位時,必須用共聚焦熒光顯微鏡觀測.因為共聚焦熒光顯微鏡(相當于醫(yī)院給病人診斷的 CT)觀測的是細胞內(nèi)一個切面上的顏色.如果在一個切面上在同一區(qū)域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區(qū)域內(nèi)有相互作用.普通熒光顯微鏡看到的是一個立體圖象, 無法確定蛋白質(zhì)共定位現(xiàn)象.在進行定位或共定位同時,也可以對細胞核進行染色. 這樣,在細胞中就有三種顏色.細胞核的顯色幫助你確定共定位發(fā)生的位置.上面介紹的活細胞定位,其優(yōu)點是表達的熒光蛋白熒光強,沒有背景,觀測方便.
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