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PEI是歷shishang繼多聚賴氨酸之后發(fā)現(xiàn)的第二種聚合物轉(zhuǎn)染試劑。PEI能將DNA縮合成帶正電荷的微粒，這些微?？梢责ず系綆в胸?fù)電荷的細(xì)胞表面殘基，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞，胺的質(zhì)子化導(dǎo)致反離子大量涌入以及滲透勢(shì)降低。上述變化導(dǎo)致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與DNA形成的復(fù)合物（polyplex）進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。復(fù)合物拆解后，DNA就能自由的融合到細(xì)胞核中。聚Ethylene亞胺（Polyethylenimine，PEI）是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的質(zhì)子海綿(proton sponge)體。

轉(zhuǎn)染試劑線性PEI MAX溶液的配制

線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽(Linear Polyethylenimine Hydrochloride)是線性化聚乙烯亞胺PEI 25,000的升級(jí)產(chǎn)品，是一種功能更為強(qiáng)大的高效瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。與PEI 25000的區(qū)別在于：1）*水解（去乙?；?）PEI 25000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性 3）含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺片段，其質(zhì)子化氮水平比PEI25000提高11%以上。

另PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用，并且更高效。PEI 25K轉(zhuǎn)染溶液通常需要幾個(gè)小時(shí)才能制備，而PEI MAX 40K可以在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)化為即用型溶液。而且PEI 25K含有4-11%的殘余丙?；?，可防止聚合物主鏈與DNA強(qiáng)烈結(jié)合。PEI MAX 40K*去乙?；慕Y(jié)構(gòu)意味著每批產(chǎn)品的表現(xiàn)始終如一。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI MAX(#24765)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過程。

1.產(chǎn)品特性:

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)染級(jí)線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽(PEI MAX)(Linear Polyethylenimine Hydrochloride)

2.溶液配制

此指導(dǎo)說明書是經(jīng)polysciences公司研究，測(cè)試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而高效的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。

材料：

1g #24765、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級(jí)水）、1N OH化鈉、25mL無菌塑料吸管、一次性0.1µm, 0.2µm, 0.22µm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、pH計(jì)、移液器、磁力攪拌棒、帶油管的真空泵

配制過程：

1g #24765——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加1N NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過濾消毒——分裝，4°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。#24765比#23966易溶，可適當(dāng)少量加酸，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。