蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
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所 在 地蘇州市
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更新時(shí)間：2023-06-27 07:17:53瀏覽次數(shù)：80次
聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)天根 瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 增強(qiáng)型-DP219 ?快速：整個(gè)操作過程快速方便，十幾分鐘即可完成回收工作。 ?便捷：無需平衡液，室溫溶膠。 ?高效：的離心柱和精心配制的緩沖液，可以大量回收到高純度的目的DNA。
天根瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 增強(qiáng)型-DP219
| 目錄號(hào) | 規(guī)格 |
| DP219-02 | 50次 |
| DP219-03 | 200次 |
? 快速：整個(gè)操作過程快速方便，十幾分鐘即可完成回收工作。
? 便捷：無需平衡液，室溫溶膠。
? 高效：的離心柱和精心配制的緩沖液，可以大量回收到高純度的目的DNA。
下游應(yīng)用
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。
天根-瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(增強(qiáng)型)(離心柱型) DP 219使用說明【點(diǎn)擊進(jìn)入下載中心】
儲(chǔ)存條件
該 試 劑 盒 所 有 組 分 置 于 室 溫 ( 1 5 - 3 0 ℃ ) 干 燥 條 件 下 ， 可 保 存 1 2 個(gè) 月 。 若 溶 液 產(chǎn) 生 沉
淀 ， 使 用 前 可 在 3 7 ℃ 水 浴 中 預(yù) 熱 1 0 m i n 以 溶 解 沉 淀 ， 不 影 響 效 果 。
注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1. 電泳時(shí)請(qǐng)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2. 如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用TAE電泳緩沖液。
3. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
4. 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。
5. 如果回收率較低，可在膠充分溶解后檢測(cè)pH值，如pH值大于7.5,可向含有DNA的膠溶 液中加10-30μl3 M醋酸鈉(pH5.2)將pH值調(diào)到5-7之間。
6. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。
操 作 步 驟
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
1. 將單 一 的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分)放入干凈的離心管
中，稱取重量。
注意：使用切膠器(OSE-GC)切膠時(shí)，切膠器口對(duì)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠中的DNA條帶下壓切割。切膠完成后，推動(dòng)中心桿，將膠塊推入干凈的離心管中。根據(jù)凝膠膠孔寬度可進(jìn)行單次切割和連續(xù)切割。
2. 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PE(如果凝膠重為0.1 g,其體積可視為100 μl,則加入300 μ溶膠液PE。使用切膠器切割1%的瓊脂糖凝膠，單塊重量約為0.06 g,實(shí)際膠塊重量與 凝膠濃度及厚度相關(guān)),室溫15-25℃溶膠5-10 min,其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，
以確保膠塊充分溶解。 若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊)。
注意：對(duì)于大于5 kb以上的大片段或者是膠濃度大于1.5%的情況下，建議50℃加熱溶膠 5-10 min;膠塊溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)。
3. 將上 一 步所得溶液加入 一個(gè)吸附柱CA5中(吸附柱放入收集管中),室溫放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g )離心30-60 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA5放入收集
管中。
注意：吸附柱容積為800 μl,若樣品體積大于800 μl可分批加入。
4. 向吸附柱CA5中加入600 μl漂洗液PW 使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇), 12,000
rpm(~13,400×g)離心30-60 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA5放入收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW加入后靜置2-5 min再離心。
5. 重復(fù)操作步驟4。
6. 將吸附柱CA5放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心2 min,盡量除盡漂洗液。 將吸附柱CA5置于室溫放置數(shù)分鐘，地晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí) 驗(yàn) 。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。
7. 將吸附柱CA5放到一個(gè)干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫緩沖液TB, 室溫放置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min收集DNA溶液。
注意：洗脫體積不應(yīng)小于30 l,體積過少影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有 很大影響。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH?O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH 值低于7 .0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。DNA也可以用 緩沖液(10 mM Tris-Cl,pH8.0)洗脫。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重 新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將DNA溶 液收集到離心管中。
D N A 濃 度 及 純 度 檢 測(cè)
回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。
DNA應(yīng)在OD2so處有顯著吸收峰， OD26o值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。
ODzsp/OD28o比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH?O,比值會(huì)偏 低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。
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