MTT檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-01X98522

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
MTT檢測試劑盒	MTT Assay Kit	500次	FS-01X98522

MTT廣泛用于檢測細(xì)胞生長，其原理是MTT可以被活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結(jié)晶，而死細(xì)胞則無此活性。深紫色的formazan結(jié)晶被溶解后可以通過測定490nm波長的光吸收而測定出其濃度，并由此推測出細(xì)胞的活力，細(xì)胞增殖越旺盛，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1．采用*的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，減少誤差。

2．背景低，靈敏度高，線性范圍寬，重復(fù)性好。

3．本產(chǎn)品為足夠500次(5個96孔細(xì)胞培養(yǎng)板)微孔板檢測。

4．可用于生物活性因子活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、腫瘤放射敏感性測定等。

儲存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運(yùn)輸和保存)，有效期一年。

使用方法：

下面操作是檢測細(xì)胞毒性的試驗(yàn)，其他應(yīng)用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗(yàn))，操作步驟可以以此為基礎(chǔ)稍作修改即可，故不再贅述。

㈠、接種細(xì)胞

1．按常規(guī)消化法消化匯合的單層細(xì)胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。

2．200g離心5分鐘收集細(xì)胞沉淀。

3．用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸浮液并計數(shù)。

4．將細(xì)胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據(jù)細(xì)胞的生長速度決定)，如果不知道生長數(shù)度，一般可以稀釋到1×10個/mL。

5．將足夠量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細(xì)胞懸液。

6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細(xì)胞懸液(對正常細(xì)胞)。如果是腫瘤細(xì)胞，則加入100μL腫瘤細(xì)胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。注意：一定要把細(xì)胞加在孔的正中，否則細(xì)胞會聚集在孔的角落處，影響試驗(yàn)。

7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細(xì)胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對照(用于測OD時調(diào)零)，第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應(yīng)對第11 列反應(yīng)的影響。

8．按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長期。

㈡、藥物處理

9．用培養(yǎng)基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度，則需要預(yù)試驗(yàn)確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。

10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養(yǎng)基(不要觸動細(xì)胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養(yǎng)基。

11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養(yǎng)基，這些孔將作為+培養(yǎng)基+細(xì)胞-藥物的對照。

12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物，每列加入一個濃度的藥物。

13．按常規(guī)方法把96孔板繼續(xù)放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間，此段時間即為藥物處理細(xì)胞的時間，由用戶自己決定。

14．處理結(jié)束后去除第2 到第11列(共10列，均含細(xì)胞)所有孔中的培養(yǎng)基，并再加入100μL新鮮培養(yǎng)基。

15．每天換培養(yǎng)使細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增2-3倍(所需時間隨細(xì)胞不同而不同)。

㈢、存活細(xì)胞計數(shù)

16．在生長末期，去除第1到第11列各孔中的培養(yǎng)基后，再加入100μL新鮮培養(yǎng)基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時。注意：溶液A在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。

17．小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基(含溶液A)。由于培養(yǎng)基可能會影響光吸收，最好盡可能去除。

18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結(jié)晶物充分溶解。

19．由于產(chǎn)物不穩(wěn)定，故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。

?注意：用第1 列各孔(+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對照)調(diào)零。

20．計數(shù)同樣處理的各次重復(fù)的平均值。

21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度絕對值差別很大，一般需將其轉(zhuǎn)化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數(shù)據(jù)的平均數(shù)作為100%)，這樣便于計算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。注意：如果測生長曲線，則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現(xiàn)S型，具有促進(jìn)作用的則斜率加大。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Homo sapiens (Human)

C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for C4 Binding Protein Beta (C4BPb) 96T Homo sapiens (Human)

補(bǔ)體因子P(CFP)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Factor P (CFP) 96T Homo sapiens (Human)

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Mus musculus (Mouse)

核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL) 96T Rattus norvegicus (Rat)

補(bǔ)體成分1r(C1r)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, R Subcomponent (C1r) 96T Homo sapiens (Human)

生長調(diào)節(jié)致癌基因β(GROβ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Regulated Oncogene Beta (GROb) 96T Homo sapiens (Human)

補(bǔ)體成分1s(C1s)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, S Subcomponent (C1s) 96T Homo sapiens (Human)

補(bǔ)體成分8γ(C8γ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 8g (C8g) 96T Homo sapiens (Human)

水解酶(BLMH)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Bleomycin Hydrolase (BLMH) 96T Homo sapiens (Human)

前梯度蛋白2(AGR2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Anterior Gradient Protein 2 (AGR2) 96T Homo sapiens (Human)

絡(luò)絲蛋白(RL)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Reelin (RL) 96T Rattus norvegicus (Rat)

甲狀腺激素反應(yīng)基因(THRSP)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Thyroid Hormone Responsive (THRSP) 96T Homo sapiens (Human)

蛋白C抑制因子(PCI)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Protein C Inhibitor (PCI) 96T Homo sapiens (Human)

妊娠相關(guān)血漿蛋白A2(PAPPA2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Pappalysin 2 (PAPPA2) 96T Homo sapiens (Human)

補(bǔ)體成分1q子成分C(C1qC)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, Q Subcomponent C (C1qC) 96T Homo sapiens (Human)

泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L1 (UCHL1) 96T Rattus norvegicus (Rat)

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Rattus norvegicus (Rat)

生長分化因子5(GDF5)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 5 (GDF5) 96T Homo sapiens (Human)

4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷（MUG） 0.1 M58129 0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鑒定

mEC 肉湯 mE.Coli Broth 250 M58130 用于0157選擇性增菌(USDA-FSIS方法)

mTSB肉湯 mTSB Broth With Novobiocin 250 M58131 用于0157選擇性增菌(ISO方法)

新生霉素A Novobiocin 2mg/支*5 M58132 添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌

SD-39瓊脂 SD-39 Agar 250 M58133 用于濾膜法大腸桿菌0157的分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)

平板計數(shù)瓊脂（PCA） Plate Count Agar 250 M58134 國際標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)瓊脂,含糖,用于細(xì)菌總數(shù)的測定(SN標(biāo)準(zhǔn))

煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB） Brilliant Green Lactose Bile Broth 250 M58135 用于大腸菌群、大腸桿菌的測定(SN標(biāo)準(zhǔn))

EC 肉湯 E.Coli Broth 250 M58136 用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測定(SN標(biāo)準(zhǔn))

伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 250 M58137 弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌(SN標(biāo)準(zhǔn))

營養(yǎng)肉湯 (NB) Nutrient Broth 250 M58138 一般細(xì)菌培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種、復(fù)壯、增菌等(GB標(biāo)準(zhǔn))

營養(yǎng)瓊脂 (NA) Nutrient Agar 250 M58139 細(xì)菌計數(shù)、不含糖，可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標(biāo)準(zhǔn))

乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 Lactose Bile Broth 250 M58140 用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))

乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基 Lactose Broth 250 M58141 用于大腸菌群,糞大腸菌群,大腸桿菌的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))

去氧膽酸鹽瓊脂 Desoxycholate Lactose Agar 250 M58142 用于大腸桿菌固體平板測定,腸道菌選擇性分離

MR-VP培養(yǎng)基 Methyl Red Voges Proskauer Broth 250 M58143 用于大腸桿菌的甲基紅和VP試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 250 M58144 用于大腸菌群的固體平板檢測(SN標(biāo)準(zhǔn))

西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 Simmons Citrate Agar 250 M58145 用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))

腸道菌計數(shù)瓊脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 250 M58146 用于腸道菌計數(shù)和腸桿菌科鑒別(MERCK方法)

菌種保存培養(yǎng)基 Strain Store Medium 250 M58147 用于常用細(xì)菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇４?/p>

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 Lactose Peptone Broth 250 M58148 用于飲用水，水源水中總大腸菌群的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))

Cary-Blair 氏運(yùn)送培養(yǎng)基 Cary-Blair Transport Medium 250 M58149 用于運(yùn)送腸道致病菌標(biāo)本

MTT檢測試劑盒哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ) Columbia Blood Agar Base 250 M58150 營養(yǎng)非常豐富，用各種細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(AFNOR EP IDF標(biāo)準(zhǔn))

亮綠乳糖培養(yǎng)基 Brilliant Green Lactose Medium 250 M58151 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。