細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9523

英文名稱：Hoechst Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100次

貨號(hào)：FS-X9523

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮。所以Hoechst 33258染色后，在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。

試劑盒特點(diǎn)：

1. 只需25分鐘即可完成細(xì)胞凋亡檢測(cè)的整個(gè)過程。

2. 本試劑盒提供了固定液，染色液，及抗熒光淬滅封片液。

3. 本試劑盒對(duì)貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和組織切片均適用。

4. 足夠檢測(cè)100個(gè)樣品。

試劑盒組份：

固定液————————————50ml

Hoechst 33258染色液 —————50ml

抗熒光淬滅封片液 —————— 5ml

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

白介素12(IL-12/P40)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IL-12/P40 ELISA Kit，IL-12/P40，

β羥丁酸(β-OHB)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：β-OHB ELISA Kit，β-OHB，

β2糖蛋白(β2-GP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：β2-GP ELISA Kit，β2-GP，

vav3核苷酸交換因子(VAV3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：VAV3 ELISA Kit，VAV3，

S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：S100A12 ELISA Kit，S100A12，

人抗利尿激素/血管加壓素/加壓素(ADH/VP/AVP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit，ADH/VP/AVP，

巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MDC/CCL22 ELISA Kit，MDC/CCL22，

人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ABM-Ab ELISA Kit，ABM-Ab，

膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：GDNF ELISA Kit，GDNF，

幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：YKL-40/CHI3L1 ELISA Kit，YKL-40/CHI3L1，

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MMP-13 ELISA Kit，MMP-13，

環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：cGMP ELISA Kit，cGMP，

含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit，PNPLA3/ADPN/C22orf20，

骨鈣素(Osteocalcin)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Osteocalcin ELISA Kit，Osteocalcin，

高密度脂蛋白(HDL)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HDL ELISA Kit，HDL，

鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶2C型成員1(ATP2C1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ATP2C1 ELISA Kit，ATP2C1，

生長(zhǎng)激素釋放肽(Ghrelin)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Ghrelin ELISA Kit，Ghrelin，
細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

氟替卡松丙酸酯分離度用混合物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

醋酸戈雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

重組蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:ea 英文名稱：

卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體規(guī)格:20mg 英文名稱：

群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物規(guī)格:30mg 英文名稱：

溶液用于生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1ml 英文名稱：

胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Amiodarone Related Compound E

尼泊金甲酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Methylparaben