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| 貨號 | FS-X10968 |
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中文名稱：MEK抑制劑(Refametinib)
英文名稱：Refametinib
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10968
產(chǎn)品介紹:
Refametinib(RDEA119,BAY86-9766)是MEK抑制劑，對MEK1和MEK2的IC50分別為19nM和47nM，有抗腫瘤活性。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：923032-37-5 別名：BAY 869766;BAY 86-97661;RDEA119 純度：98.46% 分子量：572.34 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
美麗鹽單胞菌人鈣網(wǎng)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠催乳(PRL)
帚狀曲霉人網(wǎng)膜Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)
礦泉水 大腸菌群人基質(zhì)γ羧基谷蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)
絲球霉屬人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)
局限青霉人螺旋肽Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)
首爾紅色桿菌人溶體相關(guān)膜蛋白2Bacillus thuringiensis subsp. israelensis小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)
支氣管敗血波氏菌人軟骨糖蛋白39Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)
節(jié)桿菌人不透光相關(guān)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)
大腸埃希菌人鞭毛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)
柱狀假絲酵母人多聚血清蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)
根霉人胞漿免疫球蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)
大豆慢生根瘤菌人纖維介蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)
嗜嗜熱雙歧桿菌豬亞種人泛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)
草螺菌人類粘蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)(SP)
釀酒酵母人彈性蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)(SP)
孟氏假單胞菌人套膜蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠血管活性腸肽(VIP)
離子通道蛋白27抗體桂花耳COC1細胞耐藥亞株
跨膜受體蛋白Notch-2抗體冷杉囊孔菌昆蟲卵巢細胞
生殖細胞增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體小鱗毛銹傘貓星形腦膠質(zhì)細胞
親核β1抗體粉色小菇牛陀螺狀細胞
MEK抑制劑(Refametinib)煙曲霉 Tanshinlactone過氧化物體增殖物激活受體α2
球孢白僵 Noreugenin甘油二酯O-?；D(zhuǎn)移
根瘤 Pinostilbenoside周期Ⅰ
異常威克漢姆酵母 ConfluentinAurora激A
根霉屬 Norcepharadione B分裂周期因子20
果生鏈核盤 Carpachromene周期B1
釀酒酵母 Penduletin分裂周期因子2
雞腿菇 SteppogeninMyc原癌基因蛋白
相思根瘤 Hinokiol內(nèi)啡肽
糙皮側(cè)耳 Canadine諾達病
糞腸球 Friedelanol纖維
費氏中華根瘤（未復(fù)核） Oleuropeic acid補體1q
大禿馬勃 Lecanoric acid精蛋白1
釀酒酵母 Dihydrophaseic acid核因子κB
假單孢 Lacinilene C三磷腺檸檬裂解
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