當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> TNKS2抑制劑(NVP-TNKS656)
貨號 | FS-X10966 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
英文名稱:NVP-TNKS656
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10966
產(chǎn)品介紹:
NVP-TNKS656是一種有效的,選擇性的TNKS2抑制劑,IC50值為6nM,是PARP1和PARP2的選擇性的300多倍。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1419949-20-4 別名:TNKS656 純度:99.14% 分子量:494.58 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
運(yùn)動節(jié)桿菌人卷曲蛋白8Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)
南類芽孢桿菌人蝸牛同源物2Bacillus thuringiensis小鼠蛋白激B(PKB)
球孢白僵菌人高爾基蛋白73Bacillus thuringiensis小鼠蛋白激B(PKB)
花生生莖點(diǎn)霉人TU3A蛋白Bacillus thuringiensis小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)
大腸埃希菌人電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽Bacillus thuringiensis小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)
南冰川酵母人皮膚蛋白Bacillus thuringiensis subsp. alesti小鼠血紅氧合2(HO-2)
鏈格孢人可溶性蛋白185Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠血紅氧合2(HO-2)
嗜鹽沉積物桿菌人降解加速因子Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)
大腸埃希菌人T活化連接蛋白Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)
更新世肉桿菌人SH2攜帶蛋白Bacillus thuringiensis subsp. finitimus小鼠促卵泡(FSH)
解淀粉芽孢桿菌人B連接蛋白Bacillus thuringiensis subsp. entomocidus小鼠促卵泡(FSH)
假單孢菌人尿相關(guān)蛋白CBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)
曲霉人銜接蛋白活化因子1Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)
葡萄酒有孢漢遜酵母人錨蛋白BBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)
曲霉人潛伏膜蛋白1Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)
猴頭人重組激活基因2Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠吡啶交聯(lián)物(PY)
骨保護(hù)蛋白/護(hù)骨抗體迷孔肉色扇小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,經(jīng)mitomycin-C處理,P3,300萬細(xì)胞(干細(xì)胞庫保藏)
骨保護(hù)蛋白配體抗體破骨細(xì)胞分化因子小白菇人羊膜細(xì)胞
骨橋蛋白抗體分泌型磷蛋白1人大紅菇人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株
增食欲A/欲激A褪色紅菇急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
TNKS2抑制劑(NVP-TNKS656)墻壁圣格奧爾根 二烯基二硫交替氧化
地衣芽孢桿 硫代硫硫轉(zhuǎn)移
大豆慢生根瘤 乙龍腦酯硫雙加氧
栗褐鏈霉 3-羥基丁載脂蛋白E
大腸埃希氏 角鯊烯蛋白磷脂
北京棒桿 腎上腺酮苯解氨
大腸埃希 S-腺甘基蛋胰島受體絡(luò)激
列氏糖霉 N-乙酰-神經(jīng)硝基還原
Brenneria salicis 毛地黃皂類胡蘿卜
黑曲霉 脫落膠原I
枯草芽孢桿 D-地衣基質(zhì)金屬蛋白14
大腸埃希氏 (S)-N-縮水甘油鄰苯二甲酰亞基質(zhì)金屬蛋白15
乙鈣不動桿 Nervogenic acid內(nèi)結(jié)合蛋白
黑根須腹 Xanthorin前列腺E2
大腸埃希氏桿 Rocaglaol脂肪炎癥因子
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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