TNKS2抑制劑(NVP-TNKS656)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10966

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：TNKS2抑制劑(NVP-TNKS656)

英文名稱：NVP-TNKS656

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10966

產(chǎn)品介紹:

NVP-TNKS656是一種有效的，選擇性的TNKS2抑制劑，IC50值為6nM，是PARP1和PARP2的選擇性的300多倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1419949-20-4

別名：TNKS656

純度：99.14%

分子量：494.58

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌人卷曲蛋白8Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)

南類芽孢桿菌人蝸牛同源物2Bacillus thuringiensis小鼠蛋白激B(PKB)

球孢白僵菌人高爾基蛋白73Bacillus thuringiensis小鼠蛋白激B(PKB)

花生生莖點(diǎn)霉人TU3A蛋白Bacillus thuringiensis小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)

大腸埃希菌人電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽Bacillus thuringiensis小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)

南冰川酵母人皮膚蛋白Bacillus thuringiensis subsp. alesti小鼠血紅氧合2(HO-2)

鏈格孢人可溶性蛋白185Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠血紅氧合2(HO-2)

嗜鹽沉積物桿菌人降解加速因子Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)

大腸埃希菌人T活化連接蛋白Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)

更新世肉桿菌人SH2攜帶蛋白Bacillus thuringiensis subsp. finitimus小鼠促卵泡(FSH)

解淀粉芽孢桿菌人B連接蛋白Bacillus thuringiensis subsp. entomocidus小鼠促卵泡(FSH)

假單孢菌人尿相關(guān)蛋白CBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)

曲霉人銜接蛋白活化因子1Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)

葡萄酒有孢漢遜酵母人錨蛋白BBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)

曲霉人潛伏膜蛋白1Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)

猴頭人重組激活基因2Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠吡啶交聯(lián)物(PY)

骨保護(hù)蛋白/護(hù)骨抗體迷孔肉色扇小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，經(jīng)mitomycin-C處理，P3,300萬細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）

骨保護(hù)蛋白配體抗體破骨細(xì)胞分化因子小白菇人羊膜細(xì)胞

骨橋蛋白抗體分泌型磷蛋白1人大紅菇人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株

增食欲A/欲激A褪色紅菇急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
TNKS2抑制劑(NVP-TNKS656)墻壁圣格奧爾根二烯基二硫交替氧化

地衣芽孢桿硫代硫硫轉(zhuǎn)移

大豆慢生根瘤乙龍腦酯硫雙加氧

栗褐鏈霉 3-羥基丁載脂蛋白E

大腸埃希氏角鯊烯蛋白磷脂

北京棒桿腎上腺酮苯解氨

大腸埃希 S-腺甘基蛋胰島受體絡(luò)激

列氏糖霉 N-乙酰-神經(jīng)硝基還原

Brenneria salicis 毛地黃皂類胡蘿卜

黑曲霉脫落膠原I

枯草芽孢桿 D-地衣基質(zhì)金屬蛋白14

大腸埃希氏 (S)-N-縮水甘油鄰苯二甲酰亞基質(zhì)金屬蛋白15

乙鈣不動(dòng)桿 Nervogenic acid內(nèi)結(jié)合蛋白

黑根須腹 Xanthorin前列腺E2

大腸埃希氏桿 Rocaglaol脂肪炎癥因子
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)