PAK1抑制劑(IPA-3)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10965

產(chǎn)品介紹:

IPA-3是一種選擇性的，ATP非競爭的PAK1抑制劑，IC50值為2.5μM，對PAKs4-6沒有抑制作用。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：42521-82-4

純度：98.0%

分子量：350.45

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：PAK1抑制劑(IPA-3)

英文名稱：IPA-3

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10965

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

枯草芽孢桿菌枯草亞種人腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子Bacillus thuringiensis小鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)

白僵菌人IPO-38蛋白Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

枯草芽孢桿菌人切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

銅綠假單胞菌人羰基化蛋白Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)

綠色木霉人磷化核因子κB抑制蛋白α（IKKα human ）Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)

釀酒酵母人樁蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)

彎孢人小表皮粘蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)

大腸埃希菌人類似60S核糖體蛋白L21Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)

紫色鏈霉菌人類粘蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)

平滑假絲酵母人MAX二聚化蛋白1Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

硬皮馬勃屬人水閘蛋白14Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

銹色野野村氏菌人可溶性半乳糖結(jié)合凝集3Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)

乳粉沙門氏菌（陰性）人主要穹窿蛋白Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)

小卷霉人泛蛋白DBacillus thuringiensis小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)

露濕漆斑菌人toll樣受體2Bacillus thuringiensis小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)

根霉年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)

少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2抗體豹斑毒鵝膏菌正常大鼠腎細(xì)胞

增食欲B/欲激B亞拉巴馬全緣孔菌非洲綠猴腎細(xì)胞

寡腺合成-1斑點(diǎn)嗜藍(lán)孢孔菌人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株

陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)器1抗體小果雞樅小鼠睪丸上皮細(xì)胞15P-1（干細(xì)胞庫保藏）
PAK1抑制劑(IPA-3)日本根霉 2-乙酰α葡萄糖

釀酒酵母托品酮促性腺抑制

少根根霉雌三磷化腺活化蛋白激

漢遜德巴利酵母犬尿喹啉磷化蛋白激A

榆黃菇 β-Tocotrienol增殖相關(guān)蛋白

香菇 3-甲基鄰苯二叉頭蛋白L2

芽孢桿屬 1-氨基茚滿類固生成因子1

哈茨木霉 SorafenibDoublesex和Mab-3相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子

科赫芽胞桿 Sorafenib叉頭型基因P3

大腸埃希 Canertinib (CI-33)腺環(huán)化

釀酒酵母遠(yuǎn)志擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變因子

疣梗青霉 α-托品半胱雙加氧

變異鏈球咖啡苯乙酯半胱亞磺脫羧

蠟樣芽孢桿水蘇四糖,四水維生D

三方氏酵母 α-松脂交替氧化

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