Wee1抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10310

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Wee1抑制劑

英文名稱：MK-1775

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10310

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：MK-1775

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

MK-1775是一種有效的Wee1抑制劑，IC50值為5.2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：955365-80-7

別名：AZD1775

純度：99.60%

分子量：500.6

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

板栗蛇孢日規(guī)殼LRRC59蛋白抗體Human PELI1 拓樸異構(gòu)Ⅱ(TopoⅡ)

苜蓿中華根瘤菌LRRC41蛋白抗體Human CYP11A1(Cholesterol side-chain cleavage enzyme, mitochondrial) 脫氧皮質(zhì)(DOC)

日本根霉促黃體生成受體抗體Human PELI2 脫氧尿三磷(DUTP)

美味側(cè)耳(紫孢側(cè)耳)乳清蛋白α抗體Human PFKFB2 脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)

球孢白僵菌核纖層蛋白B2抗體Human PES1 脫氧核糖核Ⅰ(DNase-Ⅰ)

金黃亞種層粘蛋白α5抗體Human HCRTR1(Orexin receptor type 1) 脫氧吡啶啉(DPD)

白僵菌L-瓜抗體Human PEX1 脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)

紅曲霉泌乳升高蛋白1抗體Human CYP11A1(Cholesterol side-chain cleavage enzyme, mitochondrial) 脫氫表雄硫酯(DHEA-S)

大腸埃希菌溶體相關(guān)膜蛋白4α抗體Human PEX11G 脫氫表雄S7(DHEA-S7)

亞細(xì)亞菌屬分化相關(guān)基因14抗體Human PDS5B 脫氫表雄(DHEA)

枯草芽孢桿菌β內(nèi)酰樣蛋白2抗體Human HCRTR1(Orexin receptor type 1) 脫-γ-羧基凝血原(DCP)

杏鮑菇神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體Human PDXDC1 褪黑(MT)

膠孢可溶性半乳糖凝集3結(jié)合蛋白抗體Human PDSS2 突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)

非無菌藥品（陽性）瘦抗體Human PDE6C 突觸泡蛋白(SYP)

Flavobacterium磷脂磷酯LPIN1抗體Human PDZD2(PDZ domain-containing protein 2) 突觸回蛋白2(SYNJ2)

微紅微球菌G蛋白偶聯(lián)受體6抗體Human PDE7B(cAMP-specific 3′,5’-cyclic phosphodiesterase 7B) 透明質(zhì)(HAase)

小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)紫（五加B）

新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格： >99.0 %(GC)五加皂B

沙門氏菌Salmonella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)人參三
Wee1抑制劑香菇 3,4-二羥基-3-環(huán)-1,2-二酮XII

Paenibacillus 3,5-二芐氧基苯乙酮SLC22A5

腐皮殼 2-氨基-5--2,6-二氟二苯甲酮破骨關(guān)聯(lián)受體

糖化酵母 L-苯氨酰鹽鹽旋毛蟲IgG抗體

根白蟻傘 2--5-黃體生成釋放

匍枝根霉原變種 2-溴-4-氟肉桂肝配蛋白B受體2

斷裂諾卡氏 [5,10,15,20-四(4-甲氧苯基)-21H,23H-卟吩]合鈷(II)性;通透性增加蛋白

蕈狀芽孢桿 6,7-二甲氧基-2,4-喹唑啉二酮MutY同源物

芽孢八疊球?qū)?/span> 1-芐基-5-乙氧基海因解整合金屬蛋白8

黃柄曲霉 3-苯磺還原型輔Ⅰ

殼格孢屬 2'-羥基苯丁酮磷脂酰肌

馬闊里類芽孢桿內(nèi)型-2,3-降二甲酰亞蛋白S

潮濕纖維單胞 7--5-(2-氟苯基)-1,3-二氫-2H-1,4-苯并二氮雜卓-2-酮蛋白C

草假單胞 N-芐氧羰基-D-蛋CXC趨化因子配體14

明串珠屬 4-氟-5-羥基-2-甲基巨噬集落激因子1受體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)