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貨號	FS-X10452

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：STAT3抑制劑(Stattic)

英文名稱：Stattic

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10452

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Stattic

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg|100mg

Stattic是一種有效的STAT3抑制劑，常用于癌癥治療。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：19983-44-9

純度：98.0%

分子量：211.19

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌磷化脫氫α1抗體Anti-CLC AntibodyG-CSF Receptor(CD114)

孟氏假單胞菌3磷肌依賴性蛋白激1抗體Anti-CLDN16/Claudin-16 AntibodyE-鈣粘附分子(E-Cadherin/CDH1/CD324)

羊肚菌（不能訂購）磷化3磷肌依賴性蛋白激1抗體Anti-CLDN2 AntibodyE-鈣粘附分子(E-Cadherin)

靈芝p53結(jié)合蛋白1抗體Anti-CLDN5 AntibodyCXC趨化因子配體1(CXCL1)

黑曲霉磷化蛋白激C亞性D型抗體Anti-CLDN5 AntibodyCX3C趨化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)

金灰青霉磷化蛋白激C亞性D型抗體Anti-CLEC9A AntibodyCD80分子(CD80/B7-1)

玫瑰擬層孔菌蛋白激C zeta 抗體Anti-CLK2 AntibodyB活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)

仁果殼小圓孢菌嗜性粒顆粒關(guān)鍵堿性蛋白抗體Anti-CLPP Antibody10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10/CXCL10)

嗜熱脂肪地芽孢桿菌胰島原抗體Anti-CLPX Antibody10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)

耐寒短桿菌原蛋白轉(zhuǎn)化4抗體Anti-CLOCK Antibody左右決定因子1(LEFTY1)

黑曲霉膜鈣ATP1抗體Anti-CLPB Antibody組織轉(zhuǎn)谷酰(TGM2)

西宮皮生球菌磷烯羧激抗體Anti-CLPX Antibody組織因子通道抑制因子2(TFPI2)

阿魏側(cè)耳多聚合α抗體Anti-CLPX Antibody組織型纖溶原激活因子(tPA)

枯草芽孢桿菌多聚合g抗體Anti-CLU Antibody組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)

蘇云金芽孢桿菌神經(jīng)內(nèi)分泌肽QRFP抗體Anti-CMA1 Antibody組織金屬蛋白抑制因子4(TIMP4)

佛雷德里克斯堡假單胞菌巰基氧化1抗體Anti-CMA1 Antibody(PB0032)組織金屬蛋白抑制因子3(TIMP3)

蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大腸埃希氏菌DH5α/pLuc-NCEscherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
STAT3抑制劑(Stattic)曲霉 3-溴-5-谷氧還蛋白1

殼梭孢屬（都不提供） 5-氨基-2-谷氧還蛋白2

枯草芽孢桿 5-溴-2-髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)

鉛黃腸球 3-氨基-2-鐵蛋白12

粉紫小菇 (S)-3-氨基-2-酮鹽鹽異檸檬脫氫1

假絲酵母屬 1-丁基-3-甲基咪唑甲磺鹽亞精合

青霉 4-溴噻唑精合成

香菇* 1-乙基-3-甲基咪唑硫乙酯熱休克蛋白糖蛋白96

雷夫松氏 4-氨基苯基 α-D-吡喃甘露糖白介24

蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 16,17-alpha環(huán)氧孕烯酮醋酯白介26

釀酒酵母六氟酮三水合物白介28

枯草芽孢桿 6-甲基白介29

遠(yuǎn)青鏈霉雙(2-二苯基膦乙基)苯基磷尾加壓2

卷枝毛霉卷枝變型 2′,3′-二脫氧胸同源框蛋白Hox-A6

日本根霉 6-溴-2-吡啶甲β微管蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)