當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)
貨號 | FS-X10963 |
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英文名稱:BML-277
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號:FS-X10963
產(chǎn)品介紹:
BML-277是一種選擇性的檢測點(diǎn)激酶2(Chk2)抑制劑,IC50為15nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:516480-79-8 別名:Chk2 Inhibitor II;C 3742 純度:97.14% 分子量:363.8 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
枯草芽孢桿菌人甲狀腺結(jié)合球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)
球毛殼菌人晚期糖基化終末產(chǎn)物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
巨獸芽孢桿菌人C多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
點(diǎn)柄粘蓋牛肝菌人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)
畢赤酵母人胰高血糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)
弗雷德里克斯堡假單胞菌人胰多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
大腸埃希菌人胰島自身抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
殼蕉孢菌人谷脫羧Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)
雜色尾孢人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)
類動膠杜搟氏菌屬人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
休哈塔假絲酵母休哈塔亞種人未磷化類胰島生長因子結(jié)合蛋白-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
大豆慢生根瘤菌人甲狀旁腺激樣蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
解桿菌人內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
柑橘炭疽盤孢菌人apelin 12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)
大腸埃希菌人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)
喜鹽芽孢桿菌人胰島原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體萬壽菊鏈格孢家兔皮膚細(xì)胞
8-羥基鳥DNA糖基化向日葵鏈格孢大額牛肺細(xì)胞
µ-型阿片受體抗體絲軸黑粉菌樹鼩腎上皮樣細(xì)胞
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白2抗體角鱗灰鵝膏菌小菊頭蝠肺成纖維樣細(xì)胞
激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)耐寒短桿 毛栲利△1-吡咯啉-5-羧合成
香菇 3,4-二羥基肉桂乙酯谷氨酰合成
黃桿 DL-甲狀腺腫谷脫氫
釀酒酵母 二氫7-羥基-3-(4-羥苯基)-4-苯并吡喃酮琥珀-Q還原
大豆慢生根瘤 色C氧化還原
Botryosphaeria parva 鹽帕洛諾瓊色C還原
釀酒酵母 7-羥基黃酮琥珀-Q還原
棲植物潘隆尼亞堿湖桿 S-(5'-腺基)-L-化蛋色C氧化還原
法布里德巴利酵母 8-姜色C還原
產(chǎn)氨棒桿 紫草NADH脫氫
根瘤 β-桉葉ATP合成
粘著劍* 3,4,5-氧基苯乙烯游離睪酮
球孢白僵 羊毛甾游離雌二
核盤 木蘭花堿(化物)α2巨球蛋白
平臍蠕孢 甲磺雷沙吉蘭造血器官壞死病抗體
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