激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10963

中文名稱：激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)

英文名稱：BML-277

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10963

產(chǎn)品介紹:

BML-277是一種選擇性的檢測點(diǎn)激酶2(Chk2)抑制劑，IC50為15nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：516480-79-8

別名：Chk2 Inhibitor II;C 3742

純度：97.14%

分子量：363.8

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

枯草芽孢桿菌人甲狀腺結(jié)合球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)

球毛殼菌人晚期糖基化終末產(chǎn)物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)

巨獸芽孢桿菌人C多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)

點(diǎn)柄粘蓋牛肝菌人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)

畢赤酵母人胰高血糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)

弗雷德里克斯堡假單胞菌人胰多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)

大腸埃希菌人胰島自身抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)

殼蕉孢菌人谷脫羧Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)

雜色尾孢人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)

類動(dòng)膠杜搟氏菌屬人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)

休哈塔假絲酵母休哈塔亞種人未磷化類胰島生長因子結(jié)合蛋白-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)

大豆慢生根瘤菌人甲狀旁腺激樣蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)

解桿菌人內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)

柑橘炭疽盤孢菌人apelin 12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)

大腸埃希菌人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)

喜鹽芽孢桿菌人胰島原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)

尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體萬壽菊鏈格孢家兔皮膚細(xì)胞

8-羥基鳥DNA糖基化向日葵鏈格孢大額牛肺細(xì)胞

µ-型阿片受體抗體絲軸黑粉菌樹鼩腎上皮樣細(xì)胞

胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白2抗體角鱗灰鵝膏菌小菊頭蝠肺成纖維樣細(xì)胞
激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)耐寒短桿毛栲利△1-吡咯啉-5-羧合成

香菇 3,4-二羥基肉桂乙酯谷氨酰合成

黃桿 DL-甲狀腺腫谷脫氫

釀酒酵母二氫7-羥基-3-(4-羥苯基)-4-苯并吡喃酮琥珀-Q還原

大豆慢生根瘤色C氧化還原

Botryosphaeria parva 鹽帕洛諾瓊色C還原

釀酒酵母 7-羥基黃酮琥珀-Q還原

棲植物潘隆尼亞堿湖桿 S-(5'-腺基)-L-化蛋色C氧化還原

法布里德巴利酵母 8-姜色C還原

產(chǎn)氨棒桿紫草NADH脫氫

根瘤 β-桉葉ATP合成

粘著劍* 3,4,5-氧基苯乙烯游離睪酮

球孢白僵羊毛甾游離雌二

核盤木蘭花堿（化物）α2巨球蛋白

平臍蠕孢甲磺雷沙吉蘭造血器官壞死病抗體

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