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貨號	FS-X10790

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Epigenetic Reader Domain抑制劑

英文名稱：EPZ005687

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10790

產(chǎn)品介紹:

EPZ005687是一種有效的，選擇性的Epigenetic Reader Domain抑制劑，Ki值為24nM，對其選擇性是對EZH1的50倍，對其他15種甲基轉(zhuǎn)移酶的500倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1396772-26-1

純度：98.97%

分子量：539.67

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豬鏈球菌分型血清參考品血清型 SS19EB 病 IgG(間接法二步法)Anti-MDM2 Antibody人降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)

孟氏假單胞菌EB 病 IgM(間接法二步法)Anti-MDM4 Antibody人降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)

Leucobacter kyeonggiensis肺炎支原體 IgG(間接法二步法)Anti-MECP2 Antibody人生長抑(SS)

Nocardioides simplex肺炎支原體 IgM(間接法二步法)Anti-ME1 Antibody人生長抑(SS)

球孢枝孢流感病A IgG(間接法二步法) Anti-ME3 Antibody人生長激釋放多肽(GHRP)

平菇流感病A IgM(間接法二步法)Anti-MED1 Antibody人生長激釋放多肽(GHRP)

萎蔫短小桿菌付流感病 IgG(間接法二步法)Anti-MED13L Antibody人抑制B(INH-B)

蓋替隱球酵母付流感病 IgM(間接法二步法)Anti-MED14 Antibody人抑制B(INH-B)

空泡單胞菌流行性出血熱病 IgG(間接法二步法)Anti-MED13 Antibody人促甲狀腺釋放激(TRH)

環(huán)形凸臍蠕孢流行性出血熱病 IgM(間接法二步法)Anti-MECP2 Antibody人促甲狀腺釋放激(TRH)

枯草芽孢桿菌流行性腮腺炎病 IgG(間接法二步法)Anti-MED18 Antibody人雌激(E)

葡萄座腔菌流行性腮腺炎病 IgM(間接法二步法)Anti-MED21 Antibody人雌激(E)

無二檸檬桿菌乙型腦炎病 IgG(間接法二步法)Anti-MED24 Antibody人褪黑(MT)

傳染性支氣管炎病乙型腦炎病 IgM(間接法二步法)Anti-MED23 Antibody人褪黑(MT)

不動(dòng)桿菌人絨毛膜促性腺激(夾心法一/二步法)Anti-MED23 Antibody人6前列腺(6-K-PG)

玫瑰考克氏菌魚類白介1βAnti-MEF2B Antibody人6前列腺(6-K-PG)

Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體燼灰鏈霉菌人伯基特淋巴瘤細(xì)胞

c-Myc應(yīng)答蛋白抗體產(chǎn)色鏈霉菌人胎盤絨膜癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白157抗體白色鏈霉菌人涎腺癌細(xì)胞

G蛋白相關(guān)RABX5抗體大團(tuán)囊蟲草615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病瘤株
Epigenetic Reader Domain抑制劑短芽孢桿 2-噻吩-5-甲成纖維生長因子21

亮白曲霉胰胨-亞硫鹽-環(huán)絲瓊脂基礎(chǔ)瘟熱病

弗氏檸檬桿溴化十六烷基瓊脂（USP）瘟病抗原

黃微綠鏈霉腦心浸出液肉湯（BHI）GB標(biāo)準(zhǔn)病性出血癥

香菇17 乙(1R,2S)-2-[N-芐基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應(yīng)用試劑]瘟病抗體

醬油曲霉大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基病性出血癥抗體

葡萄座腔營養(yǎng)瓊脂(水質(zhì)監(jiān)測)抗3

禽白血病病大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基胰島生長因子1

枯草芽孢桿胰蛋白胨大豆瓊脂禽呼腸孤病抗體

柔嫩艾美耳球蟲乙(1S,2R)-2-[N-芐基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應(yīng)用試劑]β-羥丁

中國臺灣根霉孟加拉紅培養(yǎng)基酮

亞灰光柄菇結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）乙酰乙

炭疽病胰胨瓊脂培養(yǎng)基血紅蛋白

鏈格孢 2,6-二吡啶白介1α

多色節(jié)桿 MC培養(yǎng)基（不含瓊脂）低密度脂蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)