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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)
貨號(hào) | FS-X10119 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 抗酸菌(諾卡菌和紅球菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌 注意事項(xiàng): 抗酸菌或弱酸菌(諾卡菌和紅球菌等)呈紅色,非抗酸桿菌和背景呈淺藍(lán)色。主要由復(fù)紅液、脫色液組成。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱:抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml|3×100ml
貨號(hào):FS-X10119
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
稀奇鏈霉菌谷受體KA1抗體Human PTN(Pleiotrophin) 人3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒
白色假絲酵母*真核翻譯起始因子3K抗體Human KLKB1 (Plasma kallikrein) 人3-羥基-3-甲基戊二酰合1(HMGCS1)免疫試劑盒
小青霉早期生長(zhǎng)反應(yīng)蛋白3抗體Human TFCP2(Alpha-globin transcription factor CP2) 人3-葡萄糖孕二(PdG)免疫試劑盒
薄層菌EMSY蛋白抗體Human LBX1 (Transcription factor LBX1) 人Ⅱ型前膠原羧基端肽(PⅡCP)免疫試劑盒
細(xì)疣籃狀菌FBXO36 F-box蛋白相關(guān)蛋白36抗體Human ANOS1 (Anosmin-1) 人Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)免疫試劑盒
亮白曲霉T1蛋白抗體Human LMNA(Lamin-A) 人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒
金龜子綠僵菌RAB6蛋白抗體Human BAG6(Large proline-rich protein BAG6) 人Ⅱ型膠原交聯(lián)C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌皮卡丘抗體Human THOP1(Thimet oligopeptidase) 人Ⅱ型膠原代謝產(chǎn)物C2C(C2C)免疫試劑盒
折疊馬賽菌ELAVL4蛋白抗體Human FTMT(Ferritin, mitochondrial) 人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒
棘孢木霉表皮生長(zhǎng)因子樣激受體1Human LTBP4 (Latent-transforming growth factor beta-binding protein 4) 人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒
葡萄園有孢漢遜酵母磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human KDELC1 (KDEL motif-containing protein 1) 人Ⅱ型肺泡表面抗原(KL-6/MUC1)免疫試劑盒
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌電子轉(zhuǎn)移黃蛋白α抗體Human INIP (SOSS complex subunit C) 人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)免疫試劑盒
柵欄擬諾卡氏菌前列腺E受體蛋白4抗體Human IQUB (IQ and ubiquitin-like domain-containing protein) 人26S蛋白體非ATP調(diào)節(jié)亞基11(PSMD11)免疫試劑盒
食堿戈登氏菌風(fēng)疹病糖蛋白抗體Human TTPA(Alpha-tocopherol transfer protein) 人25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒
串泡雙型毛霉細(xì)小變種EFR3A蛋白抗體Human ISOC2 (Isochorismatase domain-containing protein 2) 人25羥基維生D2(25 HVD2)免疫試劑盒
谷棒桿菌ENAH蛋白抗體Human ICA1(Islet cell autoantigen 1) 人20S蛋白體(20SP)免疫試劑盒
天山中慢生根瘤菌Mesorhizobium│tianshanense 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99%(HPLC)楊
砂單胞菌Arenimonas│oryziterrae 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(HPLC)對(duì)羥基丁酯
: HBUM77348資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:用于HPLC衍生化,≥99.0% (HPLC)對(duì)羥基酯
抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)*松乳菇 1-(4-基)-3-甲基-5-吡唑啉酮環(huán)磷鳥
烏飯樹擬莖點(diǎn)霉 2,5-二溴己二二乙酯NADH還原
豇豆慢生根瘤 4-溴鄰苯二甲酐色C還原
阪崎腸桿 亞磷二甲酯布魯東氏酪激
淡黃曲霉 5-吡啶-2-羧銅鋅超氧化物歧化
黑曲霉 DL-2-甲基丁甲酯L-天冬氧化
裂孔平伏 2-特戊酰氨基-6-皮考啉交替氧化
菊苣假單胞 2-特戊酰基吡啶脫氫
釀酒酵母 1-萘基異酯V型ATP
煙芽孢桿 5-氟-2-異亞基氨基氧苯脫氧核糖核
枯草芽孢桿 溴二二甲酯透明質(zhì)
釀酒酵母 鈉固氮
華根霉 3,5-二甲基-1-氫-吡咯-2-羧叔丁酯-4-羧乙酯條紋花葉病
黃傘(可訂購(gòu)) 2-溴二苯并呋喃線條花葉病
畢赤酵母 3,4-二肼鹽鹽1.6二磷果糖
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