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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> HER2抑制劑(Irbinitinib)
貨號(hào) | FS-X10654 |
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產(chǎn)品介紹:
Irbinitinib(ARRY-380;ONT-380)是高效的選擇性的HER2抑制劑,IC50值為8nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):937263-43-9 別名:ARRY-380;ONT-380 純度:99.57% 分子量:480.52 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱(chēng):HER2抑制劑(Irbinitinib)
英文名稱(chēng):Irbinitinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10654
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
乳桿菌屬Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBA2 Antibody動(dòng)力蛋白胞漿1重鏈1(DYNC1H1)
絨毛青霉辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBB Antibody頂體蛋白(ACR)
柄桿菌生物標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBE2I Antibody凋亡抑制因子5(API5)
尖孢鐮刀菌堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBD Antibody凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激I(ASK1)
生癌腸桿菌膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBB Antibody(PB0182)淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2(APLP2)
大腸桿菌Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBE2I Antibody淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)
白僵菌Cy5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBE2I Antibody淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)
土曲霉金色變種Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBE2Q2 Antibody淀粉樣蛋白β1-40(Aβ1-40)
地衣芽孢桿菌Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBE3A Antibody淀粉γ(Amyγ)
嗜鹽動(dòng)性球菌PE標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UBR2 Antibody淀粉β(Amyβ)
三葉草根瘤菌羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-UCP2 Antibody淀粉α(Amyα)
木賊鐮孢羅丹明標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-UCHL1 Antibody電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽(ETFβ)
麥根腐平臍蠕孢FITC標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-UCP2 Antibody電子轉(zhuǎn)移黃蛋白α肽(ETFα)
平菇(南京1號(hào))膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-UCP1 Antibody電子傳遞黃蛋白脫氫(ETFDH)
青霉 堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-UGCG Antibody電壓依賴(lài)性陰離子通道蛋白1(VDAC1)
哈茨木霉生物標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-UCP3 Antibody電碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(NBC4)
腺硫激1抗體食菌小鼠肺大動(dòng)脈組織提取物
腺硫激2抗體短波單胞菌小鼠肺大靜脈組織提取物
MAWD結(jié)合蛋白抗體多頭霉小鼠肺組織提取物
PCID1蛋白抗體掘氏疫霉小鼠關(guān)節(jié)軟骨組織提取物
HER2抑制劑(Irbinitinib)枯草芽孢桿 6-甲氧基-1-萘滿(mǎn)酮頂體
意外鏈霉 3-(三氟甲氧基)氟苯對(duì)氧磷1
羅伊氏乳桿 1,4-環(huán)己烷二羧(CHDA)二氧化
釀酒酵母 5-甲氧基-2-甲基非酯化脂肪
毛霉屬 二甲基雙十八烷基化分泌型球蛋白A
大腸埃希 N-叔丁基烯酰甘
球孢白僵 戊唑甘油磷
樟疫霉 -4-甲甘油三酯
E.coli EPI400 鄰苯二甲酰亞肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子
產(chǎn)腸大腸埃希氏 1,4-二溴-2,5-二肝脂
白淺灰鏈霉 2-甲基-2,4-戊二(MPD)干擾Tau
中國(guó)漢納酵母 4-(甲硫基)高遷移率族蛋白B1
樟疫霉 硬酯鉛睪酮
黃桿 硬酯鉛谷
枯草芽孢桿 己二二酰肼核心蛋白聚糖
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