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貨號(hào)	FS-X10744

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：HDAC6抑制劑(Tubacin)

英文名稱：Tubacin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|20mg

貨號(hào)：FS-X10744

產(chǎn)品介紹:

Tubacin是一種有效的，選擇性的HDAC6抑制劑，IC50值為4nM，大約是對(duì)HDAC1的350倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：537049-40-4

純度：98.87%

分子量：721.86

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巴氏醋桿菌擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)Anti-FUT3 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153

大腸埃希菌黏膜選址（抗原）Anti-FUNDC1 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153

異常威克漢姆酵母髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原)Anti-G3BP2 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125

金針菇髓鞘相關(guān)糖蛋白(抗原)Anti-FZD9 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125

大豆慢生根瘤菌基質(zhì)金屬蛋白-1（小鼠抗原）Anti-G3BP1 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)

Bacillus aryabhattai 中腦核仁蛋白1（抗原）Anti-GAB2 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)

細(xì)麗擬盤多毛孢中腦核仁蛋白2（抗原）Anti-GABARAPL2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)

蘋果鏈格孢菌一種應(yīng)激分子抗原Anti-GABBR2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)

谷棒桿菌多藥耐藥相關(guān)蛋白3(抗原)Anti-GABRA6 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)

蠟葉散囊菌多藥耐藥相關(guān)蛋白1(抗原)Anti-GABRA4 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)

木糖氧化無(wú)色桿菌肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原)Anti-GABRA3 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

紅色鏈孢囊菌間皮(多肽抗原)Anti-GABRB1 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

小柄凸臍蠕孢MSH2抗原Anti-GABRE Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

節(jié)桿菌神經(jīng)激肽B受體（抗原）Anti-GABRD Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

總狀毛霉低分子量神經(jīng)絲蛋白（抗原）Anti-GABRG1 Antibody人抑瘤M(OSM)

敏捷食菌中分子量神經(jīng)絲蛋白（抗原）Anti-GAK Antibody人抑瘤M(OSM)

溶質(zhì)載體蛋白家族20成員2抗體地衣形芽孢桿菌人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

線粒體二羧載體蛋白抗體Herbaspirillumcanariense羅猴胎腎細(xì)胞

溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體Herbaspirillumaurantiacum高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞

突觸結(jié)合蛋白1抗體Herbaspirillumsoli白介-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞
HDAC6抑制劑(Tubacin)球黑孢 1-苯基異喹啉白介3

異常畢赤酵母 2-乙?；?3-乙基吡白介5

蠟樣芽孢桿 5-甲氧基-2-萘滿酮口蹄疫病

釀酒酵母 4-三氟甲酰繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管

水稻紋枯?。⒖萁z核）三羥甲基烷基烯酯新孢子蟲

黑曲霉 3,5-雙(三氟甲基)布病

阪崎氏年輕泰坦桿(阪崎克羅諾桿) 3,5-二(三氟甲基)苯口瘡病抗體

亮白曲霉 1--3,5-雙(三氟甲基)苯布魯氏桿病抗原

戊糖乳桿 1,3-雙(三氟甲基)-5-溴苯痘病抗體

嗜熱脂肪地球芽胞桿 4-(三氟甲基)一氧化氮

克魯斯假絲酵母 1,5-二氟-2,4-二N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖

葡枝根霉鄰硝基對(duì)叔丁基透明質(zhì)

臘狀芽胞桿 1,1,3,3-四甲基二硅氧烷透明質(zhì)

大腸埃希 2,3-二甲苯膽固

土味鏈霉 1-溴-2,4,5-三氟苯
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)