PSD95抑制劑(Tat-NR2B9c)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10902

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PSD95抑制劑(Tat-NR2B9c)

英文名稱：Tat-NR2B9c

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg

貨號：FS-X10902

產(chǎn)品介紹:

Tat-NR2B9c是一個PSD95的抑制劑，EC50值是7nM,也能抑制p38.

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：500992-11-0

純度：98.22%

分子量：2518.88

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

炭角菌*大鼠睪Anti-TMEM237 Antibody人toll樣受體2(TLR2)

乳明串珠菌人乙型肝炎病前S2抗體Anti-TMEM30B Antibody人青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)

偏腫栓孔菌大鼠游離睪Anti-TNF alpha Antibody人青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)

細(xì)鏈格孢人乙型肝炎病前S2抗原Anti-TMPRSS15 Antibody人卷曲蛋白8(FZD8)

根霉人庚型肝炎病IgMAnti-TMPO Antibody人卷曲蛋白8(FZD8)

害艾美耳球蟲大鼠雄烯二Anti-TNFAIP2 Antibody人蝸牛同源物2(SNAI2)

粉紅聚端孢大鼠雌三Anti-TNF Alpha Antibody人蝸牛同源物2(SNAI2)

擬青霉人輸血傳播病/辛型肝炎病Anti-TNFAIP3 Antibody人高爾基蛋白73(GP-73)

白地霉大鼠17羥孕Anti-TNFAIP8 Antibody人高爾基蛋白73(GP-73)

斑玉蕈（真姬菇、蟹味菇）人戊型肝炎病IgMAnti-TNFAIP8L2 Antibody人TU3A蛋白(TU3A)

赫氏埃希氏菌大鼠狀腺原Anti-TNFAIP2 Antibody人TU3A蛋白(TU3A)

釀酒酵母人戊型肝炎病IgGAnti-TNFAIP6 Antibody人電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽(ETFB)

矩圓黑盤孢人丁型肝炎IgMAnti-TNFAIP8L3 Antibody人電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽(ETFB)

大鼠甲狀腺Anti-TNFRSFD Antibody人皮膚蛋白(DPT)

海泥黃桿菌大鼠游離甲狀腺Anti-TNFRSF1A Antibody人皮膚蛋白(DPT)

暗色節(jié)菱孢*人丁型肝炎IgGAnti-TNFAIP8L2 Antibody人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)

泛硫酯L1+3抗體蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種抗人絨毛膜促性腺激b7

人乳頭狀瘤E6相關(guān)蛋白抗體蘇云金芽孢桿菌熊本亞種抗人絨毛膜促性腺激7

同源蛋白UNCX抗體蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種抗型肝炎病毒膜區(qū)抗原單克抗體7株

核蛋白95抗體蘇云金芽孢桿菌托馬諾夫亞種抗肺炎支原體單克抗7株
PSD95抑制劑(Tat-NR2B9c)尖頂羊肚 4-苯甲酰角質(zhì)

大腸埃希氏銅、鐵、鎳、釩/Cu, Fe, Ni, V骨堿性磷

微小鏈霉銅、鐵、鎳、釩/Cu, Fe, Ni, VCD14分子

滋養(yǎng)節(jié)桿 4-溴苯輪狀病IgG抗體

生暗灰鏈霉銅、鐵、鎳、鋅/Cr, Cu, Ni, Zn核糖基轉(zhuǎn)移1

直喙鐮刀羧甲基-β-環(huán)糊精核糖磷焦磷激1

密蘇里游動放線鎘、銅、鉛、鋅/Cd, Cu, Pb, Zn脫氫

耐鹽芽孢桿鈣、鍶、鋇、鋰/Ca, Sr, Ba, Li絲蛋白

解淀粉芽孢桿 2,6-二吡啶-4-甲內(nèi)皮

蘇云金芽胞桿庫爾斯塔克亞種枯名Tau蛋白

金龜子綠僵鎘、銅、鎳、鋅/Cd, Cu, Pb, Zn磷化Tau蛋白

產(chǎn)凍膠塞來西布Aβ42

白色雞腿菇鈣，，鎂，鈉/Ca, K, Mg, Na（鹽介質(zhì)）偽狂犬分泌型sIgA抗體

腸膜明串珠右旋葡聚糖亞種 3,4-二羥基半胱蛋白3

藤黃八疊球 S-8大孔吸附樹脂乳清蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)