腺苷激酶抑制劑(5-Iodotubercidin)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10565

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：腺苷激酶抑制劑(5-Iodotubercidin)

英文名稱：5-Iodotubercidin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|25mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10565

產(chǎn)品介紹:

5-Iodotubercidin是一種有效的adenosine kinase抑制劑，IC50值為26nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：24386-93-4

別名：NSC 113939;5-ITu

純度：98.85%

分子量：392.15

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

厚白盤革菌鋅指蛋白828抗體Anti-NFATC1 Antibody尿激型纖溶原激活因子受體(uPAR)

黑腐皮殼菌胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體（閉鎖小帶蛋白1）Anti-NFATC2 Antibody尿黑1,2-雙加氧(HGD)

球孢白僵菌凋亡相關(guān)蛋白激3抗體Anti-NFATC1 Antibody尿二磷糖基轉(zhuǎn)移8(UGT8)

皺褶青霉鋅指蛋白211抗體Anti-NFATC2 Antibody尿卟啉原脫羧(UROD)

枯草芽孢桿菌鋅指蛋白749抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥脫(GDA)

麥芽糖假絲酵母磷化zeta相關(guān)蛋白70抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥激1(GUK1)

大耳霉Z DNA結(jié)合蛋白抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥環(huán)化激活因子2B(GUCA2B)

弗雷德里克斯堡假單胞菌鋅結(jié)合乙脫氫結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Anti-NFATC3 Antibody鳥環(huán)化激活因子2A(GUCA2A)

黑曲霉鋅指蛋白481抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥轉(zhuǎn)(OAT)

巨型艾美耳球蟲鋅指蛋白ZBTB34抗體Anti-NFATC4 Antibody鳥脫羧抗1(OAZ1)

堆形艾美耳球蟲鋅指蛋白297B抗體Anti-NFE2L2 Antibody(PB0327)黏膜地址黏附分子(MAdCAM1)

芽孢桿菌屬鋅指蛋白340抗體Anti-NFE2L2 Antibody黏病耐藥蛋白2(MX2)

樟疫霉鋅指蛋白855抗體Anti-NFE2L1 Antibody黏病耐藥蛋白1(MX1)

蘇云金芽孢桿菌日本亞種鋅指蛋白ZBTB5抗體Anti-NFIA Antibody(PB1136)尼克酰腺二核磷氧化5(NOX5)

桔林油脂酵母鋅指蛋白ZBTB6抗體Anti-NFIB Antibody尼克酰腺二核磷氧化4(NOX4)

淡紫擬青霉菌(現(xiàn)1)鋅指蛋白ZBTB7C抗體Anti-NFKB1 Antibody尼克酰腺二核磷氧化1(NOX1)

固生蛋白M抗體嗜鞣管囊酵母人骨骼肌細(xì)胞提取物

纖維細(xì)胞源性蛋白志賀毒性大腸埃希氏菌人滑膜細(xì)胞提取物

末端多聚腺2蛋白抗體總狀橫梗霉人椎間盤髓核細(xì)胞提取物

精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白Oligophrenin-1抗體產(chǎn)棒桿菌人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞提取物
腺苷激酶抑制劑(5-Iodotubercidin)肉紅鐮孢四(三苯基膦)鎳過(guò)氧化物8

大腸埃希 3-羥基-2-硝基吡啶P物質(zhì)

黑曲霉 4-羥基-3-甲酯總膽汁

密歇根鏈霉* cis-八氫吡咯烷[3,4-b]β-內(nèi)啡肽

葡萄座腔 4-(4-氨基苯基)丁粒巨噬集落激因子

枯草芽孢桿枯草亞種 3,4-二苯巨噬集落激因子

短小芽孢桿 2,3-二苯粒集落激因子

普通變形桿 4-溴-1-茚酮安卡拉病

羅氏屬鄰溴苯血清淀粉樣蛋白A

耐冷冷桿二溴異尿α1性糖蛋白

孟氏假單胞 N-乙酰-D-蛋孕酮

pBiFC-VN173 (Plasmid #22010) 氟化鋁三水合物核呼吸因子1

植物乳桿 Cryolite線粒體轉(zhuǎn)錄因子A

施氏假單胞 L-別異亮己糖激

Chelativorans 鹽替羅非班親環(huán)D
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)