PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鯉春病毒(SVCV)核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10673
產(chǎn)品分類：RT-PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
芥黃蜜環(huán)菌培養(yǎng)基: 72模式菌株: no岳樺提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 液氮超低溫凍結(jié)法；定期移植法

米根霉培養(yǎng)基: CM0014產(chǎn)乳。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

異常漢遜酵母培養(yǎng)基: CM0013產(chǎn)酯生香，紹興酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0013用于清酒提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌枯草亞種培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -1040℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

ATCC19119研究、質(zhì)量控制模式菌株: no種屬: Listeria│ivanovii提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: CM0217生長條件: 37℃

北極海單胞菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌；產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)Bate-半乳糖苷酶水樣/海冰提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0002產(chǎn)果膠酶提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

ATCC9889=NRRLY-987有刺激生長作用模式菌株: no種屬: Metschnikowia│pulcherrima提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0013生長條件: 28℃

口蹄疫病（A4亞型）檢驗模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 4培養(yǎng)基: 0生長條件: 37

癭草黃青霉培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -1041℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

穎苞莖點霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no麥冬葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 26 定期移植法

ATCC19185產(chǎn)FAD。模式菌株: no種屬: Corynebacterium│glutamicum提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 37℃

極細交鏈孢菌生長條件: 25培養(yǎng)基: 14枝干提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

4-溴-2-硝基

N,N,N',N'-四甲基甲脒六磷鹽

二乙胺溴氫鹽

2-(4--3-硝基甲酰)

tert-Butyl diethylphosphonoacetate  二乙基膦?；沂宥□? 27784-76-5

N-Cyanoimido-S,S-dimethyl-dithiote  N-基二硫代亞胺碳二甲酯  10191-60-3

Ethanethioic acid S-ethyl ester  硫代乙乙酯  625-60-5

2,2'-Azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride  2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)  2997-92-4

大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體1(AIL-R1)ELISA試劑盒 ，英文名： AIL-R1 ELISA Kit

人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA檢測試劑盒HumanAnnexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 96T/48T

大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)免疫試劑盒 Rat Laminin alpha 1,LAMA1 ELISA Kit

CLIAKitfoNF-BetaELISAKit大鼠腫瘤壞死因子β規(guī)格：48T/96T

全組織琥珀脫氫酶活性染色試劑盒10次

ELISAKitai-parotidductAb人抗腮腺管抗體規(guī)格：48T/96T
鯉春病毒(SVCV)核酸定性檢測試劑盒異澤蘭黃素22368-21-4中文別名：2-(3,4-二甲氧基基)-5,7-二羥基-6-甲氧基并吡喃-4-  

英文名：Eupatilin  

英文別名：2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6-methoxychromen-4-one  

登錄號：22368-21-4

分子式：C18H16O7

分子量：344.32

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：黃色針晶

規(guī)格：20 mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。

提取來源：菊科植物艾Artemisia argyi Levl. et Vant. 的干燥葉

溶解性：溶于ＤＭＳＯ、熱，混合溶劑，不溶于等溶劑。

熔點：234-236℃

藥理藥效：散熱止痛, 溫經(jīng)止血，有治療胃潰瘍和鎮(zhèn)痙的作用,能調(diào)控血糖

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年