p38抑制劑(SCIO-469)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10898

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：p38抑制劑(SCIO-469)

英文名稱：SCIO-469

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號：FS-X10898

產(chǎn)品介紹:

SCIO-469是p38選擇性的ATP競爭抑制劑，IC50值是9nM.

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：309913-83-5

別名：Talmapimod

純度：98.07%

分子量：513.0

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

親和鏈霉菌人腺病抗原Anti-TCEAL4 Antibody人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)

絲膜菌屬大鼠白介9Anti-TCF3 Antibody人胰島原(PI)

氧化亞鐵硫桿菌（暫不提供）大鼠巨噬移動抑制因子Anti-TCF4 Antibody人胰島原(PI)

微白諾卡氏菌人旋毛蟲抗體Anti-TCF19 Antibody人胰島受體β(ISR-β)

芽孢桿菌人破傷風抗體Anti-TCEAL6 Antibody人胰島受體β(ISR-β)

片球菌屬大鼠轉(zhuǎn)化生長因子αAnti-TCF7 Antibody人糖化血紅蛋白A1c(A1c)

Laceyella大鼠孕激/孕Anti-TCF7L1 Antibody人糖化血紅蛋白A1c(A1c)

豬鏈球菌人鉤端螺旋體IgMAnti-TDGF1P3 Antibody人胰高血糖樣肽1(GLP-1)

彎孢菌大鼠雌激Anti-TCOF1 Antibody人胰高血糖樣肽1(GLP-1)

大腸埃希菌人鉤端螺旋體IgGAnti-TDGF1 Antibody人甲狀腺激免疫球蛋白(TSI)

庫爾勒海洋桿菌人阿巴Anti-TEAD1 Antibody人甲狀腺激免疫球蛋白(TSI)

嗜線蟲致病桿菌大鼠血管內(nèi)皮粘附分子Anti-TESK1 Antibody人甲狀旁腺激(PTH)

節(jié)桿菌大鼠白介8Anti-TEAD3 Antibody人甲狀旁腺激(PTH)

蘇云金芽胞桿菌人白喉抗體Anti-TEF Antibody人甲肟前列腺D2(PGD2-MOX)

球孢白僵菌人囊蟲病抗體Anti-TECR Antibody人甲肟前列腺D2(PGD2-MOX)

釀酒酵母大鼠脂聯(lián)Anti-TESK2 Antibody人高敏甲狀腺(u-T4)

UL16結(jié)合蛋白2抗體紅緣層孔菌倉鼠/小鼠7

核磷化1抗體田頭菇抗乙酰受體小鼠7

泛結(jié)合E2樣蛋白抗體秦氏蜜環(huán)菌抗補體C1抑制物小鼠7

尿二磷葡萄糖醛轉(zhuǎn)移1A9核果假尾孢菌抗I型補體受體小鼠7
p38抑制劑(SCIO-469)土星擬威爾酵母subsufficiens變種、硫根/Cl-, SO42-肺疫

枯草芽孢桿枯草亞種鎘、銅/Cd, Cu副流感病

大腸埃希氏 2-氨基-8-萘-6-磺肝生長因子

肉梭 C型砷、銻/As, Sbα3

海南鏈霉大孔吸附樹脂A21β1

光黑腹胰島（豬胰腺)新蝶呤

廣布鹽紅砷、銻/As, Sb神經(jīng)生長因子

河流弧 N-羥乙酰神經(jīng)1,25二羥基維生D3

蠟狀芽孢桿砷、銻/As, Sb肌球蛋白重鏈

大腸埃希氏(大腸桿) 苯基-β-D-吡喃葡萄糖, 水合物錫蛋白

巴氏醋桿砷、銻/As, SbToll樣受體7

8-氨基-2-萘磺Toll樣受體9

毛木耳砷、鉛/As, Pb附紅體抗體

大腸埃希膽鈉（牛）葡萄糖-6-磷

釀酒酵母化銫新喋呤
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)