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貨號(hào)	FS-X10402

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：mTOR激活劑(自噬抑制劑)

英文名稱：MHY1485

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10402

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：MHY1485

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

MHY1485是一種mTOR激活劑，也是一種自噬(autophagy)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：326914-06-1

純度：99.40%

分子量：387.39

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

華盛頓腥擲孢菌血小板衍化生長(zhǎng)因子γ抗體Anti-AK2 Antibody(PB1089)存活抗體/生存蛋白(Surv)

運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌（現(xiàn)1）血小板47蛋白抗體Anti-AKAP12 Antibody脆性組三聯(lián)體(FHIT)

虎掌菌*相關(guān)血漿蛋白A2抗體Anti-AK1 Antibody催乳誘導(dǎo)蛋白(PIP)

水鹽單胞菌屬血漿谷羧肽抗體Anti-AKR1C1/C2 Antibody催乳抑制激(PIH)

殼菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-AKR1B10 Antibody催乳釋放激(PRH)

弗吉尼亞鏈霉菌撲克蒙蛋白抗體Anti-AKR1B1 Antibody催乳(PRL)

粟酒裂殖酵母癌易感基因相關(guān)蛋白2Anti-AKR1D1 Antibody催產(chǎn)受體(OXTR)

多主葡萄殼菌細(xì)小清蛋白抗體Anti-AKR1D1 Antibody催產(chǎn)(OT)

灰葡萄孢（灰霉病菌）脂酰肌聚糖A抗體Anti-AKT1 Antibody促有絲分裂因子(MF/MPF)

Havobacterium原鈣粘蛋白11抗體Anti-AKR7A2 Antibody促胰液/胰泌(Secretin)

綠色木霉P選擇糖蛋白配體1抗體Anti-AKT2 Antibody(PB0006)促胰液/分泌受體(SR)

秸稈色假單胞菌蛋白激N2抗體Anti-AKT2 Antibody促胰液(secretin)

黃白側(cè)耳G蛋白偶合受體激2抗體Anti-Alas1 Antibody促性腺激釋放激(GnRH)

釀酒酵母早期發(fā)育調(diào)控蛋白2抗體Anti-ALDH1A1 Antibody促?；鞍?ASP)

克魯弗酵母磷酯Cβ3Anti-ALCAM Antibody促胃液受體(GsaR)

污黑腐皮殼血小板源性生長(zhǎng)因子A抗體Anti-ALDH18A1 Antibody促睡眠肽(DSIP)

無害李斯特菌Listeria│innocua 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

乳桿菌屬Lactobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

斯魯菲亞紅酵母Rhodotorula│slooffiae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
mTOR激活劑(自噬抑制劑)木耳(雪白林) 苯新戊烷乙二酯Bcl-2相關(guān)死亡促進(jìn)因子

膠凍樣芽胞桿 3-聯(lián)苯磷化Bcl-2相關(guān)死亡促進(jìn)因子

解脂亞羅酵母 4-聯(lián)苯葡萄糖

具黃曲霉叔丁氧羰基-D-天冬 4-芐酯維生B3

解脂亞羅酵母 2-羥基-5-氟吡啶犬尿

擬康寧木霉 5-氟-2-甲氧基吡啶喹啉磷核糖基轉(zhuǎn)移

細(xì)鏈格孢八甘維生B5

蘇云金芽孢桿莫里遜亞種 3,6-二噠-4-甲BCA蛋白

發(fā)酵畢赤酵母 4-芐基-4-羥基唾液

反硝化鹽單胞 Boc-Lys(Z)-pNA鈣調(diào)磷

雙孢蘑菇 1-Boc-L-氮雜環(huán)丁烷-2-羧Slingshot同源物

金針菇（毛柄、冬菇）) 6-溴喹喔啉鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激激

蘋果*（可換成cfcc 7946） (1,5-環(huán)辛二烯)二化釕(II)鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激1D

矩圓黑盤孢 (1,5-環(huán)辛二烯)化釕, 聚合物鈣調(diào)依賴蛋白激II

曲霉 2-羥基丁鈉單絲蛋白激1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)