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特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
河弧菌核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9879 |
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
rTSH b MAb (Cl 442506) (100 UG)名稱: SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎(亞系);293T/17 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS;4mML-glutamine
rTrkA MAb (Cl 315104) (100 UG)名稱: 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤;C918 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;20mMHepes
rTrkA Biot Aff Pur PAb (50 UG)名稱: 小鼠T淋巴;Cl.Ly1+2-/9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;4.5g/LGlucose+1mM丙鈉+100u/mlIL-2
rTrkA Aff Pur PAb (100 UG)名稱: 人髓母瘤;Daoy DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rTreg 3-Color Flow Kit名稱: 人導(dǎo)管癌;HCC38 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;4.5g/LGlucose+1mM丙鈉
rTNF-a QKit SixPak (1 PK)名稱: 大鼠胚胎心??;H9c2(2-1) DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS;4mML-glutamine
rTNF-a Qkit (1 KT)名稱: 大鼠骨髓瘤;IR983F RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rTNF-a MAb (Cl 45418) (500 UG)名稱: 小鼠腎集合管(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rTNF-a FMAP (1 KT)名稱: 小鼠單核巨噬;J774A.1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rTNF-a DuoSet Econ Pack (1 PK)名稱: 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤;M619 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;20mMHepes
rTNF-a DuoSet (1 KT)名稱: 狗腎隆突型;MDCKsuperdome DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rTNF-a Biot Aff Pur PAb (50 UG)名稱: 大鼠氣管上皮;RTE MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)20%FBS
rTNF-a Aff Pur PAb (100 UG)名稱: 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌;MFC-GFP DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS;G418200ug/ml
rTIMP-1 QKit SixPak (1 PK)名稱: 人胃癌;MGC-803 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rTIMP-1 QKit (1 KT)名稱: 綠色熒光蛋白標(biāo)記人;HeLa-GFP RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;G418200ug/ml
rTIMP-1 MAb (Cl 150911) (500 UG)名稱: 人胃癌;MKN-45 RPMI1640(w/oHepes)20%FBS
河弧菌核酸檢測試劑盒人上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒IL-8ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒IL-8ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胃動素(MTL)ELISA試劑盒IL-8ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒IL-8ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒IL-8ELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人血管活性腸肽(VIP)ELISA試劑盒IL-9ELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人p物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒IL-9ELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人γ氨基丁(GABA)ELISA試劑盒IL-9ELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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