HDAC1和HDAC3抑制劑(Vorinostat)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10305

中文名稱：HDAC1和HDAC3抑制劑(Vorinostat)

英文名稱：Vorinostat

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|250mg|500mg|1g|5g

貨號(hào)：FS-X10305

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Vorinostat

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|250mg|500mg|1g|5g

Vorinostat是一種有效的HDAC1/3抑制劑，IC50值分別為10nM和20nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：149647-78-9

別名：SAHA

純度：99.90%

分子量：264.32

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

瘦受體抗體Human PIK3C2B 角蛋白20(CK-20)

枯草芽孢桿菌項(xiàng)韌帶彈性蛋白抗體Human PIK3IP1 角蛋白20(CK20)

粘鞭霉氧化低密度脂蛋白抗體Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) 角蛋白19(CK-19)

香菇轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白4抗體Human PIK3C2B 角蛋白18-M65(CK 18-M65)

香菇G蛋白偶聯(lián)受體69BHuman PIK3IP1 角蛋白18-M30(CK 18-M30)

草青霉李斯特菌菌體蛋白抗體Human PIK3C2G 角蛋白18(CK-18)

假單胞菌屬Rho的鳥(niǎo)核交換因子12抗體Human PILRA 角蛋白17(CK17)

果生鏈核盤菌白血病相關(guān)蛋白5抗體Human PIGB 角蛋白13(CK-13)

三棱孢小囊菌富含亮重復(fù)蛋白62抗體Human PIM2(Serine/threonine-protein kinase pim-2) 間粘附分子3(ICAM-3/CD50)

氏假單胞菌淋巴磷蛋白磷相關(guān)蛋白抗體Human PI3K p55(gamma) 間粘附分子2(ICAM-2/CD102)

解淀粉周培瑾氏菌含亮神經(jīng)膠質(zhì)瘤失活蛋白4抗體Human KLB(Beta-klotho) 間粘附分子1(ICAM-1/CD54)

皺曲毛殼淋巴性白血病相關(guān)序列1抗體Human PIF1 間粘附分子1(ICAM-1)

鼠乳桿菌L-瓜抗體Human PICK1 性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)

釀酒酵母半胱蛋白抗體Human PIGK 相關(guān)蛋白A(CagA)

釀酒酵母乳脫氫D抗體Human PIG3 (CTX)

福氏志賀氏菌蛋白激LYK5抗體Human PIGA 凋亡抑制因子(IAP)

傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(N)松脂二葡萄糖

彎孢單頂孢Monacrosporium│gampsosporum 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)吳茱萸次堿

小單孢菌Micropolyspora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)吳茱萸堿
HDAC1和HDAC3抑制劑(Vorinostat)鼠李糖乳桿 2--3-甲基-5-溴吡啶球蛋白G4

原小單孢 2-氟-5-溴苯白喉A片段

中慢生華癸根瘤 2--4-甲氧基苯酰基轉(zhuǎn)移

巨型艾美耳球蟲(chóng) 3--4-氟苯乙酮神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體

高地芽孢桿 2蛋白激R-A

土曲霉三膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白

產(chǎn)堿假單胞脫氧腺二鈉組三聚體核結(jié)合蛋白2

布雷正青霉異基二二甲酯干擾誘導(dǎo)蛋白激

美澳型核果褐腐病馬來(lái)二辛酯2,3-雙加氧2

黏結(jié)珊瑚狀放線 2,3,6-三吡啶腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6

栗疫 2--4-心肌肌凝蛋白抗體

木耳 2--4,6-二苯基嘧啶巨蛋白抗體

巨大芽孢桿 N-(2-乙基)鄰苯二甲酰亞3-乙

香菇 2-氨基-5-溴苯乙酮白介8受體α

土生叢毛單胞 1,3,5-三噻烷白介20受體

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