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貨號(hào) | FS-X10305 |
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中文名稱:HDAC1和HDAC3抑制劑(Vorinostat)
英文名稱:Vorinostat
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|250mg|500mg|1g|5g
貨號(hào):FS-X10305
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Vorinostat 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|250mg|500mg|1g|5g Vorinostat是一種有效的HDAC1/3抑制劑,IC50值分別為10nM和20nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):149647-78-9 別名:SAHA 純度:99.90% 分子量:264.32 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
瘦受體抗體Human PIK3C2B 角蛋白20(CK-20)
枯草芽孢桿菌項(xiàng)韌帶彈性蛋白抗體Human PIK3IP1 角蛋白20(CK20)
粘鞭霉氧化低密度脂蛋白抗體Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) 角蛋白19(CK-19)
香菇轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白4抗體Human PIK3C2B 角蛋白18-M65(CK 18-M65)
香菇G蛋白偶聯(lián)受體69BHuman PIK3IP1 角蛋白18-M30(CK 18-M30)
草青霉李斯特菌菌體蛋白抗體Human PIK3C2G 角蛋白18(CK-18)
假單胞菌屬Rho的鳥(niǎo)核交換因子12抗體Human PILRA 角蛋白17(CK17)
果生鏈核盤菌白血病相關(guān)蛋白5抗體Human PIGB 角蛋白13(CK-13)
三棱孢小囊菌富含亮重復(fù)蛋白62抗體Human PIM2(Serine/threonine-protein kinase pim-2) 間粘附分子3(ICAM-3/CD50)
氏假單胞菌淋巴磷蛋白磷相關(guān)蛋白抗體Human PI3K p55(gamma) 間粘附分子2(ICAM-2/CD102)
解淀粉周培瑾氏菌含亮神經(jīng)膠質(zhì)瘤失活蛋白4抗體Human KLB(Beta-klotho) 間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
皺曲毛殼淋巴性白血病相關(guān)序列1抗體Human PIF1 間粘附分子1(ICAM-1)
鼠乳桿菌L-瓜抗體Human PICK1 性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)
釀酒酵母半胱蛋白抗體Human PIGK 相關(guān)蛋白A(CagA)
釀酒酵母乳脫氫D抗體Human PIG3 (CTX)
福氏志賀氏菌蛋白激LYK5抗體Human PIGA 凋亡抑制因子(IAP)
傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(HPLC)(N)松脂二葡萄糖
彎孢單頂孢Monacrosporium│gampsosporum 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)吳茱萸次堿
小單孢菌Micropolyspora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(HPLC)吳茱萸堿
HDAC1和HDAC3抑制劑(Vorinostat)鼠李糖乳桿 2--3-甲基-5-溴吡啶球蛋白G4
原小單孢 2-氟-5-溴苯白喉A片段
中慢生華癸根瘤 2--4-甲氧基苯酰基轉(zhuǎn)移
巨型艾美耳球蟲(chóng) 3--4-氟苯乙酮神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體
高地芽孢桿 2蛋白激R-A
土曲霉 三膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白
產(chǎn)堿假單胞 脫氧腺二鈉組三聚體核結(jié)合蛋白2
布雷正青霉 異基二二甲酯干擾誘導(dǎo)蛋白激
美澳型核果褐腐病 馬來(lái)二辛酯2,3-雙加氧2
黏結(jié)珊瑚狀放線 2,3,6-三吡啶腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6
栗疫 2--4-心肌肌凝蛋白抗體
木耳 2--4,6-二苯基嘧啶巨蛋白抗體
巨大芽孢桿 N-(2-乙基)鄰苯二甲酰亞3-乙
香菇 2-氨基-5-溴苯乙酮白介8受體α
土生叢毛單胞 1,3,5-三噻烷白介20受體
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