B-Raf抑制劑(HG6-64-1)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X11047

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：B-Raf抑制劑(HG6-64-1)

英文名稱：HG6-64-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X11047

產(chǎn)品介紹:

HG6-64-1是有效選擇性的B-Raf抑制劑,來自WO2011090738A2，化合物實(shí)例9(XI-1)。在B-raf V600E轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞中IC50值為0.09μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1315329-43-1

別名：HG-6-64-01;HG-6-64-1;HG 6-64-1

純度：99.05%

分子量：577.64

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜細(xì)小鏈孢菌Bacillus thuringiensis大鼠L解(PAL)

滅癌鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)

沉積物冷彎曲菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)

綠梭鏈孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)

麥根腐平臍蠕孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)

宇佐美曲霉Bacillus thuringiensis大鼠干因子受體(SCFR)

淡天藍(lán)鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠干因子受體(SCFR)

黃空柄牛肝菌Bacillus thuringiensis大鼠基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

猴頭菇Bacillus thuringiensis大鼠基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

微小鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受體Tie1(ANG-R-Tie1)

毛地黃殼針孢*Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受體Tie1(ANG-R-Tie1)

香菇Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)

土星擬威爾酵母subsufficiens變種Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)

枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus thuringiensis大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

大腸埃希氏菌Bacillus thuringiensis大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

肉梭菌 C型Bacillus thuringiensis大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

腫瘤血管內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白Robo4抗體黃褐假單胞菌列克星敦沙門氏菌

絡(luò)絲蛋白抗體呼吸系統(tǒng)貪銅菌密爾沃基沙門氏菌

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白p130抗體產(chǎn)黃假單胞菌盧特格爾沙門氏菌

血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體賽維瓦爾假單胞菌格里沙特沙門氏菌
B-Raf抑制劑(HG6-64-1)殺黃胞鏈霉新烏頭原堿

長(zhǎng)枝木霉烏頭原堿

梭苯甲酰次烏頭原堿

間型脈孢苯甲酰新烏頭原堿

殺鮭氣單胞苯甲酰烏頭原堿

新疆假諾卡氏滇

豬鏈球分型血清參考品血清型 SS8 印

植物乳桿植物亞種次

塊新

大腸埃希氏 KFY

泡盛曲霉去甲斑蝥

Marivirga sp. 硬脂

草青霉梔子

異常漢遜酵母 5-腺三磷二鈉鹽

金黃色葡萄球金黃亞種 5-腺二磷二鈉鹽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)