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貨號 | FS-X10347 |
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中文名稱:Wnt/β-catenin通道抑制劑
英文名稱:Salinomycin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10347
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Salinomycin 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Salinomycin是一種Wnt/β-catenin通道抑制劑,作用于Wnt/Fzd/LRP復(fù)合體。Salinomycin強抑制Wnt1刺激的報告基因活性,IC50為163nM,且降低β-catenin水平。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:53003-10-4 別名:Procoxacin 純度:98.0% 分子量:751.0 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
涇陽鏈霉菌巨噬清道夫受體抗體Human ANGPT4(Angiopoietin-4) 磷脂酰乙(PEth)
窄食單胞菌生肌調(diào)節(jié)因子6抗體Human AQP1(Aquaporin-1) 磷脂酰絲(PS)
橙鱗傘甲基化CpG結(jié)合蛋白抗體Human CXCR3(C-X-C chemokine receptor type 3) 磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
球形芽孢桿菌單克抗體Human AQP-2(Aquaporin-2) 磷脂酰肌抗體IgG(PI IgG)
韓國叢毛單胞菌單克抗體Human AQP-3(Aquaporin-3) 磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)
肉糜 貂源性成分(定性)GTP結(jié)合蛋白MAS1抗體Human AQP-4(Aquaporin-4) 磷脂爬行1(PLSCR1)
意外鏈霉菌髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體Human AQP-3(Aquaporin-3) 磷脂D2(PLD2)
泡囊側(cè)耳(鮑魚菇)黑色瘤相關(guān)抗原抗體Human AQP5(Aquaporin-5) 磷脂A2(PL-A2)
串珠鐮孢菌myocardin相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體Human AQP-4(Aquaporin-4) 磷脂肌3激(PI3K)
紡錘形賴芽孢桿菌金屬應(yīng)答元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1抗體Human AQP5(Aquaporin-5) 磷乙磷(PGP)
副豬嗜血桿菌絲裂原活化蛋白激激8抗體Human CCND1(G1/S-specific cyclin-D1) 磷烯式羧激(PCK)
棘孢小單胞菌磷化絲裂原活化蛋白激激8抗體Human SST(Somatostatin) 磷葡萄糖脫氫(PGD)
盤長孢狀盤孢磷化絲裂原活化蛋白激激8抗體Human FBN1(Fibrillin-1) 磷葡萄糖變位(PGM)
盤長孢狀盤孢促進(jìn)調(diào)解蛋白家族2A抗體Human PKM2(Pyruvate kinase isozymes M1/M2) 磷PP2A癌性抑制物(CIP2A)
植物乳桿菌黑色瘤抑制活性蛋白2抗體Human GZMA(Granzyme A) 磷激1(PGK1)
植物類諾卡氏菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1Human NGB(Neuroglobin) 磷肌3激(PI3K)
鏈格孢Alternaria│alternata 質(zhì)量規(guī)格:粘度K4m,4000 mpa.s熊果
馬克斯克魯維酵母Kluyveromyces│marxianus 質(zhì)量規(guī)格:>92%,一物天麻
鐮刀菌Fusarium│oxysporum Schltdl. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,immunoproteasome抑制劑甜菊
Wnt/β-catenin通道抑制劑肺炎克雷伯氏 百里香絡(luò)合劑甲胎蛋白
多粘類芽胞桿 己丁酯甲胎蛋白異質(zhì)體3
間座殼屬 己丁酯甲肟前列腺D2
白地霉 四溴乙酯鹽(TBPE)甲狀旁腺
plenti sgRNA(MS2)_puro(Plasmid#73795)pSAMca089-p FUGW-U6-BsmBl-sg RNA009-EF1α-Puro-WPRE 3-氨基巴豆乙酯甲狀腺過氧化物
釀酒酵母 2-異基苯硫甲狀腺鈉轉(zhuǎn)運體
蛛絲細(xì)薄 2,4-二羥基吡啶甲狀腺
高山被孢霉 柳己酯甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1
海床游動微 3,5-二溴吡啶間接膽紅
蠟狀芽孢桿 依地肽間羥去甲腎上腺
大腸桿 (R)-5,5-聯(lián)苯-2-甲基-3,4--1,3,2-噁唑烷間隙連接蛋白43
黑腐皮殼 (1S,2R)-2-(二丁氨基)-1-苯基-1-堿性成纖維生長因子
印度洋硝鹽還原 硫代乙乙酯堿性磷
肯彭貪銅 乙基脲降鈣
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