20S蛋白酶體抑制劑(MG-132)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10232

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：20S蛋白酶體抑制劑(MG-132)

英文名稱：20S proteasome inhibitor

產(chǎn)品規(guī)格：5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10232

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：20S proteasome inhibitor

產(chǎn)品規(guī)格：5mg|10mg|50mg|100mg

MG-132是一種有效的非特異性的20S蛋白酶體(20S proteasome)抑制劑，作用于β5蛋白酶樣(β5chymotrypsin)活性位點(diǎn)，IC50為24.2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：133407-82-6

純度：98.0%

分子量：475.62

MG-132結(jié)構(gòu)式

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希氏菌艾滋病病抗體Human SPANXE 大鼠雌三(E3)免疫試劑盒

桿狀毛霉結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體Human SPA17 大鼠雌激硫轉(zhuǎn)移(SULT1E1)免疫試劑盒

雜色曲霉L-組脫羧抗體Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) 大鼠雌激(E)免疫試劑盒

馬克斯克魯維酵母乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白Human Spartin/SPG20 大鼠雌二受體(ER)免疫試劑盒

鞘盒菌屬組蛋白H2B.s抗體Human SPACA3 大鼠雌二(E2)抗體免疫試劑盒

產(chǎn)氣腸桿菌組蛋白去乙?；?/span>4+5+9抗體Human SPAM1 大鼠雌二(E2)免疫試劑盒

假單胞菌屬熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體Human SPACA1 大鼠垂草扁桃(VMA)免疫試劑盒

馬闊里類芽孢桿菌卟膽原脫抗體Human SPAG11A 大鼠穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)免疫試劑盒

球孢白僵菌異質(zhì)核糖核蛋白U2樣蛋白抗體Human SPANXA2/SPANXA1 大鼠成纖維生長(zhǎng)因子9(FGF9)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌肝癌衍生生長(zhǎng)因子2抗體Human SPANXB1 大鼠成纖維生長(zhǎng)因子8(FGF8)免疫試劑盒

球孢鏈霉菌肝癌相關(guān)抗原57抗體Human SPANXC 大鼠成纖維生長(zhǎng)因子23(FGF-23)免疫試劑盒

平菇補(bǔ)體C3抗體Human SP6 大鼠成纖維生長(zhǎng)因子13(FGF-13)免疫試劑盒

玫煙色棒束孢甲型流感病血凝抗體Human SPA17 大鼠成纖維生長(zhǎng)因子10(FGF10)免疫試劑盒

污黑腐皮殼甲狀旁腺功能亢進(jìn)蛋白2/分裂周期73抗體Human SPANXE 大鼠巢蛋白(NID)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母線粒體絲蛋白抗體Human Spartin/SPG20 大鼠超氧化物歧化1,可溶性(SOD1)免疫試劑盒

大西洋魯杰氏菌/鈉超化激活環(huán)核門(mén)控通道蛋白2抗體Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) 大鼠超氧化物歧化[錳],線粒體(SOD2)免疫試劑盒

血紅栓菌Trametes│sanguinea 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品紫菀

沉積物海源菌Idiomarina│sediminum 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC）白鮮堿

大腸埃希氏菌DH5α/pBH10-P(-)vif(-)Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品q
20S蛋白酶體抑制劑(MG-132)植物乳桿 3-硝基-4-白介8

枯草芽孢桿 2-戊基呋喃維生B2

無(wú) 1-芐基-2-苯基咪唑α

豇豆慢生根瘤 3-芐氧基P糖蛋白;滲透性糖蛋白

孢吸水鏈霉 3,5-吡唑羧二乙酯仙臺(tái)病抗體

黑曲霉 R-3-甲乙酯鹽鹽15脂加氧

大腸埃希氏 (1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán) (R)-扁桃鹽調(diào)節(jié)性T

大腸埃希氏桿 3-吡咯烷酮鹽鹽氨基轉(zhuǎn)移

路氏乳桿 4--6-三氟甲基嘧啶谷草轉(zhuǎn)氨;天門(mén)冬氨基轉(zhuǎn)移

黃微綠鏈霉 5-溴-2-氟-6-血小板內(nèi)皮粘附因子

Micrococcus yunnanensis 4-癸基苯抗豬圓環(huán)2型病抗體

灰黃鏈霉 2,4-二羥基-6-尿型血漿原激活物

葉點(diǎn)霉 1-芐基-4-甲基哌鹽鹽百日咳

膠孢 2-甲基喹啉鹽鹽百日咳IgG抗體

Microbacterium terricola 4-甲苯基三氟超氧化物歧化2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)