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貨號(hào)	FS-X11044

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）

英文名稱：TG100-115

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X11044

產(chǎn)品介紹:

TG100–115是PI3K γ和δ抑制劑，IC50分別為83和235nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：677297-51-7

純度：98.96%

分子量：346.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希氏菌(大腸桿菌)*Bacillus lentus大鼠苗條受體(LR/Ob-R)

NesterenkoniaBacillus coagulans大鼠瘦(LEP)

匍柄霉Bacillus circulans大鼠瘦(LEP)

解淀粉芽孢桿菌Bacillus megaterium大鼠白血病抑制因子(LIF)

矩圓黑盤孢Bacillus cereus大鼠白血病抑制因子(LIF)

莫爾氏假單胞菌Bacillus cereus大鼠L選擇(L-Selectin/CD62L)

阿姆斯特丹曲霉Bacillus pumilus大鼠L選擇(L-Selectin/CD62L)

枯草芽孢桿菌Bacillus circulans大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)

杏鮑菇Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)

大腸埃希氏桿菌Bacillus pumilus大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)

南假單胞菌Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)

糙皮側(cè)耳Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)

束紅球菌Bacillus thuringiensis大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)

線形大洋螺菌Bacillus coagulans大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

Janibacter melonisBacillus thuringiensis大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

豬鏈球菌Bacillus cereus大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)

抵抗抗體白蟻梭菌鏈球菌

細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體復(fù)制因子C馬瑞氏熱厭氧桿菌坂崎腸桿菌

S6核糖體蛋白抗體夾膜紅細(xì)菌馬德利亞沙門氏菌

細(xì)胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體類球紅細(xì)菌雷丁沙門氏菌
PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）輪蟲弧曲札茋

哈茨木霉車葉草

肺炎克雷伯氏冬青A,

發(fā)白色紅曲霉毛冬青皂甲

木糖葡萄球弗羅利辛

越南芽孢桿石當(dāng)歸

熱栗色鏈霉表蘇木

曲霉 5,7-二羥基-4-甲基

短柄帚霉 6-羥基-7-甲氧基-4-苯基;黃檀

巨大芽胞桿 4-苯基瑞香7-甲基

韓國假單胞 7,8-二羥基-4-苯基

薄層屬 4-甲基瑞香7-甲基

釀酒酵母 7,8-二羥基-4-甲基

植物乳桿 6,7-二羥基-4-(三氟甲基)

釀酒酵母 6,7-二羥基-4苯基
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)