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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> IRS-1/2抑制劑(NT157)
貨號(hào) | FS-X10895 |
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產(chǎn)品介紹:
NT157是一種選擇性的IRS-1/2抑制劑IC50為0.3到0.8μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1384426-12-3 別名:Tyrphostin NT157 純度:99.19% 分子量:412.26 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱(chēng):IRS-1/2抑制劑(NT157)
英文名稱(chēng):NT157
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg
貨號(hào):FS-X10895
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
炭黑曲霉大鼠中性粒趨化蛋白2Anti-TAF1 Antibody人白調(diào)節(jié)(LR)
松生莖點(diǎn)霉人類(lèi)嗜T淋巴Ⅰ型病Anti-TACR3 Antibody人血小板生成(TPO)
長(zhǎng)雙歧桿菌大鼠FMS樣酪激3Anti-TACR2 Antibody人血小板生成(TPO)
鴨疫里氏桿菌人麻疹病Anti-TAF1 Antibody人白血病抑制因子(LIF)
畢赤酵母大鼠FMS樣酪激3配體Anti-TAF13 Antibody人白血病抑制因子(LIF)
耐冷冷桿菌大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子9Anti-TAF1A Antibody人Salusin-α
香菇人流行性腮腺炎Anti-TAF15 Antibody人Salusin-α
膜醭假絲酵母大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子4Anti-TAF3 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)
咸海鮮芽孢桿菌人抗流行性出血熱病抗體IgGAnti-TAF4 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)
傳染性支氣管炎病人痢疾內(nèi)阿巴抗原Anti-TAF5 Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)
弗雷德里克斯堡假單胞菌大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子6Anti-TAF5L Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)
紫紅曲霉大鼠性成纖維生長(zhǎng)因子1Anti-TAF6L Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)
環(huán)形泰勒蟲(chóng)(安西株)人萊姆IgGAnti-TAGAP Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)
中間根瘤菌屬人空腸彎曲菌黏附蛋白Anti-TAIP-2 Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)
根瘤菌人衣原體蛋白樣活性因子Anti-TANK Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)
玫煙色棒束孢大鼠凋亡相關(guān)因子Anti-TAL1 Antibody人糖化蛋白(GSP)
尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體血紅鉚釘菇HASMC*培養(yǎng)基
未分化胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1抗體一色齒毛菌DMEM 培養(yǎng)基 (高糖)
囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Use1抗體葡萄座腔菌(斜面)大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基
軟骨基質(zhì)相關(guān)蛋白UCMA抗體白色小環(huán)柄菇TM3細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基
IRS-1/2抑制劑(NT157)豬鏈球 六價(jià)鉻/Cr(Ⅵ)過(guò)氧化物
白僵 2--3,5-二硝基三氟甲苯葡萄糖
栗疫病 鉻/Cr5脂加氧
細(xì)交鏈孢霉 鈷/Co5脂加氧
發(fā)酵成對(duì)桿 脫氧熊果半胱蛋白9
解脂假絲酵母 L-抗壞血-2-磷酯鎂色C
麥根腐平臍蠕孢 鎘/Cd分泌型球蛋白G
類(lèi)馬鏈球 大茴香油顆粒B
副豬嗜血桿 柚皮二氫查爾酮穿孔;成孔蛋白
枯草芽孢桿 甘草輸血傳播病
黏液桿胰島生長(zhǎng)因子1
蒼黃鏈霉 愈創(chuàng)奧肌
禽腺病Ⅰ型 鈣/Ca酮戊二脫氫復(fù)合體
野尻鏈霉 鉍/Bi檸檬合
球色單隔孢屬 羥基瓜爾膠異檸檬脫氫
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