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貨號	FS-X10345

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：RAR/RXR核受體激動劑

英文名稱：Retinoic acid

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg|1g|5g

貨號：FS-X10345

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Retinoic acid

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg|1g|5g

Retinoic acid是一種天然的RAR/RXR核受體激動劑。Retinoic acid也結(jié)合到PPARβ/δ，Kd為17nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：302-79-4

別名：ATRA;Tretinoin;Vitamin A acid;all-trans-Retinoic acid

純度：98.36%

分子量：300.44

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

棒彎孢線粒體融合蛋白1抗體Human MDH1 離子胞內(nèi)通道蛋白4(CLIC4)

白腐菌O6甲基鳥DNA甲基轉(zhuǎn)移抗體Human ALDH1A1(Retinal dehydrogenase 1) 卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)

炭疽盤孢菌肌肉骨骼受體酪激抗體Human MDMX 卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)

仁果叢梗孢結(jié)核分枝桿菌抗體Human MDM2 卵泡抑樣蛋白1(FSTL-1)

枯草芽孢桿菌膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體Human MED15 卵泡抑(FS)

冷海希瓦氏菌膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體Human MED17 膽固?；D(zhuǎn)移(LCAT)

費氏中華根瘤菌膜相關(guān)環(huán)指蛋白3抗體Human SLIT2(Slit homolog 2 protein) 卵巢癌抗原X1(OVX1)

肉座菌屬膜相關(guān)環(huán)指蛋白7抗體Human MCCC1 硫氧化還原蛋白(Trx)

大黃歐文氏菌膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體Human MCCC2 硫氧還蛋白域包含蛋白6(TXNDC6)

沙漠畢赤酵母膜相關(guān)環(huán)指蛋白9抗體Human MCEE 硫氧還蛋白還原(TrxR)

粗柄白蘑激-M2Human MCM10 硫乙酰肝蛋白多糖2(HSPG2)

扣囊復(fù)膜孢酵母間皮抗體Human MCM3(Minichromosome maintenance complex component 3) 硫褪黑色(MS)

巴氏醋桿菌基質(zhì)金屬蛋白-1抗體Human MCM8 硫軟骨蛋白聚糖5(CSPG5)

微球菌基質(zhì)金屬蛋白-1抗體Human MCM-BP 硫軟骨N-乙酰半乳糖基轉(zhuǎn)移1(CSGALNACT1)

美澳型核果褐腐病菌基質(zhì)金屬蛋白13抗體Human MCM4 硫軟骨(CS)

考克氏菌基質(zhì)金屬蛋白-14抗體Human MCRS1 硫皮膚－硫軟骨PG(DSCSPG)

嗜冷海桿菌Marinobacter│psychrophilus 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR羊藿

: F263資源名稱: 曲霉質(zhì)量規(guī)格：>98%延胡索乙

嗜熱脂肪地芽抱桿菌Geobacillus│stearothermophilus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,粒徑20nm對香豆
RAR/RXR核受體激動劑球孢白僵雄烯二酮肌糖α

黃色籃狀 Boc-L-炔基甘基質(zhì)金屬蛋白1

交角耳 BOC-D-炔基甘基質(zhì)金屬蛋白13

木耳 L--叔亮甲酯鹽鹽基質(zhì)金屬蛋白14

葉點霉 3-溴-5-硝基三氟甲苯基質(zhì)金屬蛋白2

玫煙色棒束孢三十六烷基質(zhì)金屬蛋白26

枯草芽孢桿二十九烷基質(zhì)金屬蛋白3

樟疫霉二十六烷基質(zhì)金屬蛋白4

平菇 4,6-二-2-甲硫基嘧啶基質(zhì)金屬蛋白8

熒光假單胞 6-氨基喹喔啉基質(zhì)金屬蛋白9

鹽水海桿狀二(β-D-木糖)基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1

毛殼 N-Boc-L-叔亮基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2

豬丹絲 1-溴-6-己烷基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3

禽分枝桿環(huán)丁基鹽鹽基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4

彎曲乳桿（更名類干酪乳桿） 1,6-二己烷基質(zhì)衍生因子1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)