Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制劑)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10222

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制劑)

英文名稱：Caspase 10 Inhibitors Z-AEVD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格：20μl

貨號：FS-X10222

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Caspase 10 Inhibitors Z-AEVD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格：20μl

：1135688-47-9

濃度：5mM in DMSO

分子式：C28H39FN4O10

分子量：610.6

純度：≥95%

儲存：-20℃，有效期24個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

污膠鼓菌人乙型肝炎表面抗原單克抗體（檢測）Human STOML1 大鼠骨織(Ostn)免疫試劑盒

白色沉積物桿菌人乙型肝炎e抗原單克（包被）抗體Human STK4 大鼠骨粘連蛋白(ON)免疫試劑盒

根瘤菌人乙型肝炎e抗原單克（檢測）抗體Human STOM(Stomatin) 大鼠骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白免疫試劑盒

拜氏醋桿狀菌小鼠抗人血紅蛋白單克抗體Human STK16 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；图仔土鞲胁⊙贵wHuman STXBP3 大鼠骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒

淡紫青霉磷化HER2受體抗體Human SULT1C2 大鼠骨特性堿性磷C端肽免疫試劑盒

谷棒桿菌Ⅰ型組蛋白去乙?；?抗體Human SULT2B1 大鼠骨橋(OPN)免疫試劑盒

假單胞菌屬磷化HER2受體抗體Human SULT2A1 大鼠骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒

莖點霉屬磷化組蛋白去乙?；?/span>8抗體Human SULT4A1 大鼠骨鈣(OT)免疫試劑盒

黃柄雞油菌HLA-DR抗體Human SUMF2 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌人類白抗原G抗體Human SUMF1 大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌高遷移率族蛋白A2抗體Human TBXAS1(Thromboxane-A synthase) 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒

丁香直絲鏈霉菌高遷移率族蛋白B1抗體Human SUCLA2 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)免疫試劑盒

交鏈孢菌血紅氧合2抗體Human SUCLG2 大鼠骨成型蛋白3(BMP-3)免疫試劑盒

白金針21HOXc8抗體Human SUCLG1 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒

漏斗狀側(cè)耳（鳳尾菇）原癌基因H-ras抗體Human ARG1(Arginase-1) 大鼠骨保護(hù)(OPG)免疫試劑盒

核桃黃極毛桿菌Xanthomonas│campestris pvar. juglandis (Pammel) Dowson 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)楊梅

土生類諾卡氏菌Nocardioides│terrigena 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.95%(GC)氧化槐果堿

大腸埃希氏菌DH5α/pcDNA-Gag-NC-C15S/C18SEscherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)莪術(shù)二
Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制劑)香菇對甲苯磺酐精脫羧

雪白根霉 1-(2-)哌鹽鹽羧酯

柯達(dá)酵母屬 6,7-二甲氧基-1-苯基-1,2,3,4-四氫異喹啉溶血磷脂

紫杉木齒 8-羥基久洛尼定抗C二型膠原抗體

pet-21a 7-溴-1-庚烯Ⅱ型膠原抗體

立枯絲核 BOC-L-4-氟苯正丁

溶血葡萄球肼乙酯2丁酮

釀酒酵母喹啉-6-甲脫氧核糖核Ⅰ

鏈格孢屬 5-甲基吡-2-羧甲酯谷氨?；h(huán)化

ATCC 35030 (R)-2-氧代四-3-基芐酯apelin-12

釀酒酵母 N-Boc-L-高絲NADPH氧化

球黑孢 3-(2-乙基)-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮維生K

盤長孢狀盤孢 2,4-二甲氧基苯甲多巴轉(zhuǎn)運蛋白

沙漠類芽胞桿 4-甲氧基乙酰乙甲酯多巴D2

居泉沙雷氏 1,2,3,4-四氫異喹啉-1-羧γ氨基丁A型受體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)