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貨號(hào) | FS-X10220 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C30H44FN4O11 分子量:655.7 純度:≥95% (TLC) 儲(chǔ)存:-20℃,有效期6個(gè)月 |
中文名稱(chēng):Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑)
英文名稱(chēng):Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK
產(chǎn)品規(guī)格:20μl
貨號(hào):FS-X10220
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
醋桿菌科乙酰肝2抗體Human SGPP1(Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1) 大鼠花生四烯5脂氧合(Alox5)免疫試劑盒
彎孢菌人血清抗體Human Synaptotagmin-11 大鼠花生四烯12-脂氧合,白型(Alox12l/Alox12/Alox15)免疫試劑盒
粉紅單端孢血紅氧合 1/熱休克蛋白32抗體Human SYTL2 大鼠花生四烯(AA)免疫試劑盒
紋孢青霉磷化HER3受體抗體Human TACC1 大鼠紅生成受體(EPOR)免疫試劑盒
繩狀青霉磷化組蛋白去乙酰化4/5/7抗體Human C4B(Complement C4-B) 大鼠紅生成(EPO)免疫試劑盒
傳染性法氏囊病病異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體Human TACC3 大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )免疫試劑盒
發(fā)酵乳桿菌組蛋白H1抗體Human TACC2 大鼠黑色抗體(MC Ab)免疫試劑盒
紐纏叢梗孢組蛋白去乙?;?/span>1抗體Human Syntaxin 3 大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌HAUS3蛋白抗體Human Syntaxin 2 大鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
假單胞菌屬熱休克蛋白93抗體Human SYN1 大鼠和肽(copeptin)免疫試劑盒
松生擬層孔菌磷化組蛋白去乙酰化3抗體Human SYN2 大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌組蛋白H2B抗體Human SYNGAP1 大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激1(Tie-1)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌運(yùn)動(dòng)亞種短鏈L-3羥烷基脫氫抗體Human SYNJ1 大鼠過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物(LPO)免疫試劑盒
諾卡氏菌屬組蛋白去乙?;?/span>9抗體Human Synaptogyrin-4 大鼠過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)免疫試劑盒
黃單胞菌組蛋白去乙?;?/span>10抗體Human Synaptogyrin 1 大鼠過(guò)氧化物體增殖物激活受體β(PPAR-B/PPARD)免疫試劑盒
嗜熱脂肪地球芽胞桿菌HOXB4抗體Human Synaptojanin 2 大鼠過(guò)氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)免疫試劑盒
細(xì)極鏈格孢Alternaria│tenuissima 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,溶劑:川續(xù)斷皂乙
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3京尼平
檸檬色赤桿菌Erythrobacter│citreus 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC特女貞
Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑)卷枝毛霉 2-氨基-4-基吡啶Ca2+ATP
釀酒酵母 2-乙基-N-TNFSF14
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 2-氨基-5-基吡啶過(guò)氧化物
發(fā)酵性酵母 N-甲基-3-苯基-3-羥基鈣調(diào)磷
鹽水球 3--4-甲氧基芐鹽鹽Slingshot同源物
唐菖蒲青霉 乙基乙炔鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激激
發(fā)根根瘤 4-溴甲酯鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激1D
毛栓孔 S-Boc-2-巰基-4,6-二甲基嘧啶鈣調(diào)依賴(lài)蛋白激II
盤(pán)長(zhǎng)孢* 2-溴-4,6-二單絲蛋白激1
庫(kù)氏類(lèi)芽孢桿 1-甲?;?3-甲磺酰基-2-咪唑烷酮鈣調(diào)依賴(lài)蛋白激IV
鱗蓋紅菇 2,5-二甲基噻唑組蛋白去乙?;?/span>
有柄靈芝 2-溴-5-甲基噻唑前列腺A1
普通鏈孢囊 2-甲基-4-基噻吩II型膠原
根瘤 苯并呋喃-2-甲γ-氨基丁運(yùn)載蛋白1
厚垣孢普可尼亞 1-甲基-4-咪唑甲內(nèi)皮轉(zhuǎn)化2
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