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貨號(hào)	FS-X10988

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：KRAS-PDEδ抑制劑(Deltarasin)

英文名稱(chēng)：Deltarasin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10988

產(chǎn)品介紹:

Deltarasin是一種KRAS-PDEδ相互作用的抑制劑，能夠與PDEδ結(jié)合，Kd值為38nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1440898-61-2

純度：95.95%

分子量：603.75

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

牛摩拉氏菌Escherichia coli大鼠D-乳脫氫(D-LDH)

FlavobacteriumEscherichia coli大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)

漢遜德巴利酵母Escherichia coli大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)

盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢Escherichia coli大鼠膽固(CH)

白鱗蘑菇Escherichia coli大鼠膽固(CH)

乳乳球菌乳亞種Escherichia coli大鼠甘油三酯(TG)

唾液乳桿菌Escherichia coli大鼠甘油三酯(TG)

梭形凸臍蠕孢Escherichia coli大鼠低密度脂蛋白(LDL)

毛霉Escherichia coli大鼠低密度脂蛋白(LDL)

香菇Escherichia coli大鼠高密度脂蛋白(HDL)

黑曲霉Escherichia coli大鼠高密度脂蛋白(HDL)

傷口諾卡氏菌Escherichia coli大鼠孕受體(PGR)

蘭鏈霉菌Escherichia coli大鼠孕受體(PGR)

粘滑菇屬Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅱ轉(zhuǎn)化(ACEⅡ)

松口蘑Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅱ轉(zhuǎn)化(ACEⅡ)

黑曲霉Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)

蛋白酪磷非受體型4抗體桑木層孔菌人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞

6磷果糖激抗體氏針層孔菌小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

磷激1抗體勞埃德木層孔菌兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞

磷變位1抗體平滑木層孔菌新生牛眼晶體上皮細(xì)胞
KRAS-PDEδ抑制劑(Deltarasin)交織木霉異鉤藤堿

葡萄座腔 (+)-異胡薄荷

節(jié)桿鹽藥根堿

病研所芽孢桿堪非3,4'-二-O-甲

小孢根霉華變種掌葉半夏堿戊

棘孢青霉氧基白屈菜季堿

類(lèi)香味脫氧阿枯明

農(nóng)研所芽孢桿異魚(yú)藤色烯異黃酮

玫瑰色野野村氏雪松

地科維爾氏原千金藤那布任堿

焦曲霉異葉波羅蜜環(huán)黃酮

野土地桿紫杉脂

嚙蝕艾肯漆黃；紫鉚

魯錐梗孢植酮

黃曲霉烏沙元洋地黃
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)