ERK抑制劑(FR180204)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10740

中文名稱：ERK抑制劑(FR180204)

英文名稱：FR 180204

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10740

產(chǎn)品介紹:

FR180204是一種選擇性的，ERK的ATP競爭性抑制劑，對ERK1和ERK2的Ki值分別為0.31μM和0.14μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：865362-74-9

純度：99.60%

分子量：327.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

脫葉鏈霉菌DNA甲基轉(zhuǎn)移-3α(抗原)Anti-FASTKD3 Antibody人高分子量角蛋白(CK-HMW)

卷枝毛霉周期 C(抗原)Anti-FBL Antibody人高分子量角蛋白(CK-HMW)

埃里希正青霉降鈣基因相關(guān)肽Anti-FBXL13 Antibody人肝癌抗原(PHC)

燼灰吸水鏈霉菌Anti-FBL Antibody人肝癌抗原(PHC)

粟酒裂殖酵母色P450單氧化(多肽抗原)Anti-FBXO4 Antibody人凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)

光硬皮馬勃脫羧蛋白體36 cxorf36抗原Anti-FBXO43 Antibody人凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)

路普康湖冷桿菌(DTX1) (Deltex protein 1)抗原Anti-FBXO7 Antibody人鼻咽癌(NPC)

指狀青霉DISC1 N端抗原Anti-FBXW11 Antibody人鼻咽癌(NPC)

Paraconiothyrium hawaiiense DISC1 C端抗原Anti-FCGR1A Antibody人膀胱癌抗原(UBC)

串珠鐮孢DR3 死亡受體（抗原）Anti-FCRL5 Antibody人膀胱癌抗原(UBC)

白地霉人瘤病16型E7蛋白抗原Anti-FEN1 Antibody人廣譜角蛋白(P-CK)

耐久腸球菌表皮生長因子受體（抗原）Anti-FFAR4 Antibody人廣譜角蛋白(P-CK)

科恩根霉天冬蛋白家族蛋白(水稻蛋白的一種)（抗原）Anti-FFAR3 Antibody人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl

固氮菌一種新型的胰島因子(抗原)Anti-FFAR4 Antibody人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl

枯草芽孢桿菌脂肪結(jié)合蛋白2(抗原)Anti-FGF11 Antibody人膀胱腫瘤抗原(BTA)

釀酒酵母食道癌相關(guān)基因（抗原）Anti-FGF16 Antibody人膀胱腫瘤抗原(BTA)

斯鈣2抗體香蕉枯萎病人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色瘤細(xì)胞

分選連接蛋白4抗體蠟蚧輪枝孢菌綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞

分選連接蛋白9抗體痢疾志賀氏菌人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞

分選連接蛋白10抗體宋氏志賀氏菌人子宮內(nèi)膜腺癌(轉(zhuǎn)移)細(xì)胞
ERK抑制劑(FR180204)惡臭假單胞 3-(三氟甲基)肺絲蟲

釀酒酵母 3-氟苯乙烯弓形蟲

樟疫霉 1-氟-4-弓蛔蟲

葡萄球?qū)?/span> 3-氟-4-羥基血吸蟲抗體

大肥菇 4-(三氟甲基)芐傳染性胸膜肺炎

假單胞屬間三氟乙酮前列腺F

鏈霉 3,5-雙（三氟甲基）魏氏梭(D型)抗體

陰溝腸桿三氟磺銅(Ⅱ)前列腺F2a

釀酒酵母 3,5-二苯異酯前列腺E2

血鏈球 2,4-二氟溴苯皮質(zhì)

短裙竹蓀2-1 鄰氟苯痘抗體

腫大地桿 3--4'-氟苯酮傳染性胸膜肺炎抗體

白色念珠 5-氟小反芻獸疫

茶盤長孢* 3-丁基噻吩CD4分子

雜色曲霉 5-甲氧基-3-乙CD8分子

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