天狼星紅染色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9964

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：天狼星紅染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml|2×100ml

貨號：FS-X9964

產(chǎn)品介紹:

用途：

膠原纖維染色、分型

注意事項：

偏振光顯微鏡觀察，Ⅰ型膠原纖維呈橙黃色或紅色，Ⅲ型膠原纖維呈綠色，主要成分還包括Mayer蘇木素。

儲存條件：4℃，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

匍枝根霉原變種NK表面抑制性受體CD94抗體Human CKAP4 山羊血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)免疫試劑盒

白僵菌淋巴功能相關(guān)抗原-3抗體Human CKS2 山羊血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒

香菇—五香1號皮膚T虜獲趨化因子抗體Human Claudin 23 山羊血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒

釀酒酵母補(bǔ)體C3a過敏抗體Human CREB1 山羊血管緊張Ⅰ(ANG-Ⅰ)免疫試劑盒

猴假單胞菌巨噬炎癥蛋白-1γ抗體Human CREB3L2 山羊褪黑(MT)免疫試劑盒

奇異球菌神經(jīng)粘附分子配體1抗體Human CREST 山羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒

盤孢菌8號染色體開放閱讀框30a抗體Human CRMP1 山羊瘦(LEP)免疫試劑盒

釀酒酵母色P450 11A1抗體Human Claudin 7 山羊生長激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒

鍺栓孔菌肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1A抗體Human CLEC10A/CD301 山羊生長激(GH)免疫試劑盒

芽胞桿菌分化周期CDC42蛋白抗體Human CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) 山羊狀腺原(T3)免疫試劑盒

中國臺灣根霉磷化分化周期CDC42蛋白抗體Human CIN85 山羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒

蘋果落葉交鏈孢霉環(huán)化相關(guān)蛋白CAP-2抗體Human CREB1 山羊固(ALD)免疫試劑盒

假單胞菌屬階段特異性胚胎表面抗原-1抗體Human CKAP4 山羊前列腺內(nèi)過氧化物合1(前列腺G / H合和環(huán)氧合)(PTGS1)免疫試劑盒

硬結(jié)節(jié)桿菌20號染色體開放閱讀框202抗體Human CKS2 山羊前列腺G/H合2(PTGS2)免疫試劑盒

根瘤菌粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體Human Cortactin 山羊前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒

梨形毛霉癌胚抗原單克抗體（包被）Human Claudin 23 山羊皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格：>95%，BRQ熱科克斯體1試劑盒輪環(huán)藤堿

刺囊殼Ascotricha│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>50%,BSP選擇試劑盒羅紅霉

匍枝根霉(黑根霉)Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRP物質(zhì)受體試劑盒吉堿
天狼星紅染色液黃桿甲基四氫苯二甲酐(4:6)隱球

炭疽芽孢桿 1-苯基-4-甲基-3-吡唑烷酮B類清道夫受體2

盤孢屬 3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-茚-1-酮白介28B

孢小克銀漢霉原變種溶劑橙2肽基精脫亞氨4

枯草芽孢桿 2,4-二吡啶微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白大亞基

泰國鹽球對甲苯磺酰甘甲酯肝X受體β

戴爾根霉 3-溴-5--2-氟吡啶法尼酯X受體

泰國放線短鏈孢鄰甲苯基縮水甘油?；?膽固酰基轉(zhuǎn)移

根瘤肼單鹽鹽趨化因子c-c-基元配體19

弗蘭克氏異煙酰乙乙酯α-pro-GDNF

蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 1-β-pro-GDNF

賴芽胞桿屬 2-溴-1-(2,4-二基)乙酮豬肉銚蟲

中華靈芝（紫芝） 5-氟-2-甲氧基煙著絲粒蛋白

瓶形毛殼 4-溴-3-氟苯磺酰狼瘡抗凝IgG抗體

海洋桿 α--3,4-二苯乙酮狼瘡抗凝IgM抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)