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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MMPs抑制劑(Marimastat)
貨號(hào) | FS-X10738 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng):MMPs抑制劑(Marimastat)
英文名稱(chēng):Marimastat
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10738
產(chǎn)品介紹:
Marimastat是一種廣譜的MMPs抑制劑,作用于MMP-9,MMP-1,MMP-2,MMP-14和MMP-7,IC50值分別為3,5,6,9和13nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):154039-60-8 別名:BB2516;TA2516 純度:95.65% 分子量:331.41 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
叢毛紅曲霉BTG2(抗原)Anti-ESPL1 Antibody人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)
香蕉原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)Anti-ERN2 Antibody人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)
金耳周期D1(抗原)Anti-ETNK2 Antibody人腫瘤血管生長(zhǎng)因子(TAF)
莫哈韋芽孢桿菌β-酪蛋白(抗原)Anti-ESET Antibody人腫瘤血管生長(zhǎng)因子(TAF)
假單胞菌膽囊收縮/縮膽囊(八肽)Anti-ETS1 Antibody人角蛋白20(CK-20)
黃綠綠僵菌*CD4(抗原)Anti-ETV4 Antibody人角蛋白20(CK-20)
三葉草根瘤菌CD4抗原Anti-EXO1 Antibody人角蛋白19(CK-19)
Acinetobacter soliCD8抗原Anti-EXOG Antibody人角蛋白19(CK-19)
少根根霉原變種CD20(抗原)Anti-ETV6 Antibody人角蛋白18(CK-18)
異常漢遜酵母CD25/白介2-受體(抗原)Anti-EZH2 Antibody人角蛋白18(CK-18)
野牡丹尼爾氏酵母血小板內(nèi)皮黏附分子-1(抗原)Anti-F2RL2 Antibody人嗜鉻蛋白A(CgA)
球孢白僵菌CD34(多肽抗原)Anti-F10 Antibody人嗜鉻蛋白A(CgA)
大腸桿菌神經(jīng)粘附分子1(抗原)Anti-EZR Antibody人視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB)
芽孢桿菌癌胚抗原相關(guān)粘附分子8Anti-F12 Antibody人視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB)
黑曲霉CD68抗原Anti-F13B Antibody人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)
佛雷德里克斯堡假單胞菌干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原(抗原)Anti-F9 Antibody人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)
新型分泌細(xì)胞表面蛋白/成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白SCUBE3抗體孢囊桿菌人單核細(xì)胞白血病
內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE2抗體弱小珊瑚桿菌人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞
清道夫受體STAB2抗體黃色粘球菌人原位胰腺腺癌細(xì)胞
維甲誘導(dǎo)蛋白6抗體產(chǎn)堿假單胞菌小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞
MMPs抑制劑(Marimastat)白令海芽孢桿 N-芐基酮葡萄糖-6-磷
梨生囊孢殼 (3-溴基)三苯基溴化膦葡萄糖-6-磷脫氫
美澳型核果褐腐病 1,3-二氨基胍鹽鹽羥甲基戊二單酰
地衣芽孢桿 菁綠羥甲基戊二單酰合成
親和鏈霉 苯氧乙鈉羥脯
絲膜屬 9,10-二氫-9-氧雜-10-磷雜菲-10-氧化物乳脫氫
氧化亞鐵硫桿(暫不提供) BOC-L-精鹽鹽乳鐵蛋白
微白諾卡氏 芐基甲基生長(zhǎng)
芽孢桿 Tiglyl Glycine褪黑
片球?qū)?/span> 三氟磺酐維生K1
Laceyella 2-甲基噻唑纖溶原激活物抑制因子1
豬鏈球 4-辛基雄
彎孢 鉻變FB血漿α顆粒膜蛋白
大腸埃希 五氟酐胰島
庫(kù)爾勒海洋桿 膽固硬脂酯胰島樣生長(zhǎng)因子1
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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