MMPs抑制劑(Marimastat)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10738

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：MMPs抑制劑(Marimastat)

英文名稱(chēng)：Marimastat

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10738

產(chǎn)品介紹:

Marimastat是一種廣譜的MMPs抑制劑，作用于MMP-9，MMP-1，MMP-2，MMP-14和MMP-7，IC50值分別為3，5，6，9和13nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：154039-60-8

別名：BB2516;TA2516

純度：95.65%

分子量：331.41

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

叢毛紅曲霉BTG2（抗原）Anti-ESPL1 Antibody人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)

香蕉原癌基因蛋白（活化蛋白1）（抗原）Anti-ERN2 Antibody人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)

金耳周期D1（抗原）Anti-ETNK2 Antibody人腫瘤血管生長(zhǎng)因子(TAF)

莫哈韋芽孢桿菌β-酪蛋白(抗原)Anti-ESET Antibody人腫瘤血管生長(zhǎng)因子(TAF)

假單胞菌膽囊收縮/縮膽囊(八肽)Anti-ETS1 Antibody人角蛋白20(CK-20)

黃綠綠僵菌*CD4(抗原)Anti-ETV4 Antibody人角蛋白20(CK-20)

三葉草根瘤菌CD4抗原Anti-EXO1 Antibody人角蛋白19(CK-19)

Acinetobacter soliCD8抗原Anti-EXOG Antibody人角蛋白19(CK-19)

少根根霉原變種CD20（抗原）Anti-ETV6 Antibody人角蛋白18(CK-18)

異常漢遜酵母CD25/白介2-受體(抗原)Anti-EZH2 Antibody人角蛋白18(CK-18)

野牡丹尼爾氏酵母血小板內(nèi)皮黏附分子-1（抗原）Anti-F2RL2 Antibody人嗜鉻蛋白A(CgA)

球孢白僵菌CD34(多肽抗原)Anti-F10 Antibody人嗜鉻蛋白A(CgA)

大腸桿菌神經(jīng)粘附分子1(抗原)Anti-EZR Antibody人視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB)

芽孢桿菌癌胚抗原相關(guān)粘附分子8Anti-F12 Antibody人視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB)

黑曲霉CD68抗原Anti-F13B Antibody人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)

佛雷德里克斯堡假單胞菌干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原（抗原）Anti-F9 Antibody人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)

新型分泌細(xì)胞表面蛋白/成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白SCUBE3抗體孢囊桿菌人單核細(xì)胞白血病

內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE2抗體弱小珊瑚桿菌人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞

清道夫受體STAB2抗體黃色粘球菌人原位胰腺腺癌細(xì)胞

維甲誘導(dǎo)蛋白6抗體產(chǎn)堿假單胞菌小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞
MMPs抑制劑(Marimastat)白令海芽孢桿 N-芐基酮葡萄糖-6-磷

梨生囊孢殼 (3-溴基)三苯基溴化膦葡萄糖-6-磷脫氫

美澳型核果褐腐病 1,3-二氨基胍鹽鹽羥甲基戊二單酰

地衣芽孢桿菁綠羥甲基戊二單酰合成

親和鏈霉苯氧乙鈉羥脯

絲膜屬 9,10-二氫-9-氧雜-10-磷雜菲-10-氧化物乳脫氫

氧化亞鐵硫桿（暫不提供） BOC-L-精鹽鹽乳鐵蛋白

微白諾卡氏芐基甲基生長(zhǎng)

芽孢桿 Tiglyl Glycine褪黑

片球?qū)?/span> 三氟磺酐維生K1

Laceyella 2-甲基噻唑纖溶原激活物抑制因子1

豬鏈球 4-辛基雄

彎孢鉻變FB血漿α顆粒膜蛋白

大腸埃希五氟酐胰島

庫(kù)爾勒海洋桿膽固硬脂酯胰島樣生長(zhǎng)因子1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)