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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> VEGFR2抑制劑(Vandetanib)
貨號(hào) | FS-X10396 |
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英文名稱:Vandetanib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|500mg
貨號(hào):FS-X10396
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Vandetanib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|500mg Vandetanib是一種有效的VEGFR2抑制劑,IC50值為40nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):443913-73-3 別名:ZD6474 純度:99.89% 分子量:475.35 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
普通鏈孢囊菌增食欲B/欲激BAnti-ACSL4 Antibody凋亡相關(guān)因子(Fas)
根瘤菌鳥脫羧抗體Anti-ACSL5 Antibody凋亡相關(guān)蛋白激(DAPK)
厚垣孢普可尼亞菌O位N-乙酰葡萄糖OGT抗體Anti-ACTA1 Antibody凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)
糙皮側(cè)耳、平菇(可訂購)少突膠質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子1Anti-ACTN3 Antibody凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)
副凝聚短狀桿菌陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體Anti-ACTN3 Antibody凋亡蛋白激活因子1(APAF1)
產(chǎn)硫球鏈菌陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3抗體Anti-ACVR2A Antibody凋亡蛋白活化因子1(APAF-1)
尖鐮孢 黃瓜?;痛弋a(chǎn)受體(縮宮受體)抗體Anti-ACTN3 Antibody(PB1079)淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結(jié)合家族B成員1(FE65)
黃單胞菌緊密連接蛋白抗體Anti-ACTN4 Antibody淀粉樣前體蛋白(βAPP)
大腸埃希菌卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體Anti-ACVR2B Antibody電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃蛋白-泛醌氧化還原/電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃蛋白脫氫(ETFDH)
樹舌大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體Anti-ADA Antibody電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽(ETFB)
相思根瘤菌神經(jīng)叢蛋白B1抗體Anti-ADA Antibody電壓門控通道抗體(VGKC-ab)
狹檐薄孔菌磷化蛋白激C(T410)抗體Anti-ADA Antibody(PB0960)電壓門控通道(VGKC)
產(chǎn)黃纖維單胞菌磷化蛋白激C mu型抗體Anti-ADAM10 Antibody第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)
擬鬼傘磷化蛋白激C mu型抗體Anti-ADAM15 Antibody第10號(hào)染色體缺失并與張力蛋白同源的磷(PTEN/MMAC1)
托魯斯山鏈霉菌表面受體PILRβ抗體Anti-ADAM17 Antibody抵抗樣分子β(RELM-β)
斯氏艾美耳球蟲前列腺癌相關(guān)蛋白4抗體Anti-ADAM17 Antibody抵抗(RETN)
成團(tuán)泛菌Pantoea│agglomerans 質(zhì)量規(guī)格:>98%
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
VEGFR2抑制劑(Vandetanib)小孢毛霉 Acemetacin5羥色2B受體
鹽古桿 1-羥基芘硫轉(zhuǎn)移pi基因
蘇云金芽孢桿 天青AS轉(zhuǎn)移
枯草芽孢桿 2-溴-6-色P4503A1
大腸埃希氏 N-乙基哌孕烷X受體
東邊纖細(xì)芽孢桿 2,3,4,6-四-O-芐基-D-吡喃半乳糖蛋白磷
卡察夫氏弧 胱抑
玫瑰產(chǎn)色鏈霉 4-氨基-6-嘧啶腺A1受體
孔雀石(綠)鏈霉 4,6-二-5-嘧啶甲腺A2A受體
大腸埃希氏 Prednisone血管緊張Ⅱ受體2
小笠原德克斯酵母 托品白介17A
芽孢桿 1-芐基-2-吡咯烷酮血小板內(nèi)皮粘附分子1
尖孢鐮孢 2,4-二甲C型鈉尿肽
大腸桿 氟PKA-Cα
鞘氨單胞 萘AS-D-乙酯PKA-Cβ
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