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貨號 | FS-X10489 |
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中文名稱:Syk抑制劑(GS-9973)
英文名稱:GS-9973
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10489
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:GS-9973 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg GS-9973是一種選擇性的Syk抑制劑,IC50值為7.7nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1229208-44-9 別名:Entospletinib 純度:99.23% 分子量:411.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
葡萄座腔菌磷化Src原癌基因抗體Anti-FLT1(VEGFR1) Antibody雄烯(ADT)
釀酒酵母SH2結(jié)構(gòu)含磷肌SHIP1抗體Anti-FLT1 Antibody雄烯二(AED)
Sphingomonas desiccabilisC-SKI抗體Anti-FLT3 Antibody雄激誘導(dǎo)蛋白1(AIG1)
粘著劍菌磷化糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激1抗體Anti-FLT3 Antibody胸腺因子(TF)
枯草芽胞桿菌磷化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體Anti-FLT3LG Antibody胸腺β4(Tβ4)
謝瓦散囊菌磷化糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激1抗體Anti-FLT3LG Antibody胸腺β10(TMSβ10)
藤倉赤霉磷化糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激1抗體Anti-FLT3LG Antibody胸腺生成(TMPO)
薄層桿菌分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體Anti-FLT4 Antibody胸腺旁腺(PTMS)
枯草芽孢桿菌精結(jié)合蛋白2抗體Anti-FLT4 Antibody胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)
*灰葡萄孢溶質(zhì)載體鋅轉(zhuǎn)運(yùn)3抗體Anti-FMN1 Antibody胸腺表達(dá)趨化因子(TECK)
假諾卡氏菌絲蛋白抑制劑13抗體Anti-FMO1 Antibody胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK)
加納鏈霉菌絲/蘇激25抗體Anti-FMO4 Antibody胸合成(TYMS)
尖孢鐮刀菌染色體特異性轉(zhuǎn)錄延伸因子抗體Anti-FMO2 Antibody胸嘧啶DNA糖基化(TDG)
新城疫病閱讀障礙相關(guān)蛋白Shootin抗體Anti-FMO3 Antibody性別決定區(qū)Y框蛋白9(SOX9)
殼蕉孢菌外紡錘體樣蛋白1抗體Anti-FMO5 Antibody性別決定區(qū)Y框蛋白3(SOX3)
煙色鏈霉菌溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體Anti-FMR1 Antibody性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)
硫酯2蛋白抗體燕麥狀曲霉ST豬睪丸細(xì)胞
超氧化物歧化3抗體解脂耶氏酵母YAC-1小鼠淋巴瘤細(xì)胞
可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2B1抗體白曲霉HELF 人胚肺成纖維細(xì)胞
長鏈脂肪連接抗體紅曲紅曲菌MKN-28人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Syk抑制劑(GS-9973)新疆糖絲 喹唑啉EB病抗體
海綿假單胞 十一烷基-β-D-麥芽糖NADH脫氫
鞘氨屬 羰酰二氫三(三苯基膦)釕(II)載脂蛋白C1
喬治亞青霉 蔗糖十二烷酯大鼠T表面糖蛋白CD1a
強(qiáng)雄腐霉 6-(1H-吡唑-1-基)煙整合α5
大彎桿 四丁3-羥基犬尿
粉紅聚端孢 3-乙酰-2,5-二甲基噻吩順烏頭
大腸埃希氏(大腸桿) 三氟磺鐿水合物因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3
產(chǎn)黃青霉 庚酰組蛋白脫乙?;?
Erythrobacter pelagi 2,5-二甲氧基溴苯過氧化4
季也蒙假絲酵母 羥基乙叉二膦 一水合物 (HEDP)可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體
橄欖色青霉 2.6-二-4-硝基吡啶分泌型磷脂A2
南方樹舌 聚四?;趸?/span>
釀酒酵母 聚四抗人沙門氏桿抗體
紅淡紫灰鏈霉 聚(甲基乙烯基共聚馬來)17-β-羥基類固脫氫3
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