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貨號(hào)	FS-X10891

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：HDAC6抑制劑（Tubastatin A鹽酸鹽）

英文名稱：Tubastatin-A

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10891

產(chǎn)品介紹:

Tubastatin A鹽酸鹽是HDAC6選擇性抑制劑，IC50為15nM，比對(duì)其它亞型的抑制性高1000倍(相對(duì)HDAC8是57倍)。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1252003-15-8

純度：99.05%

分子量：335.4

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蘇云金芽孢桿菌大鼠干因子受體Anti-SSBP1 Antibody人凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)

綠色木霉大鼠基質(zhì)衍生因子1βAnti-SSBP2 Antibody人抗凝血受體(ATR)

茶樹菇人落葉型天皰瘡抗體Anti-SSTR4 Antibody人抗凝血受體(ATR)

大腸埃希菌人β2糖蛋白1抗體IgAAnti-SSX1 Antibody人凝血受體(TR)

孢小克銀漢霉大鼠血管生成受體Tie1Anti-SSH3 Antibody人凝血受體(TR)

地衣芽孢桿菌大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2Anti-ST18/Znf387 Antibody人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)

山茶盤孢人抗心磷脂抗體IgAAnti-SSH3 Antibody人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)

枯草芽孢桿菌枯草亞種大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2Anti-ST3GAL3 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)

淡紫擬青霉人β2糖蛋白1抗體IgMAnti-STAC2 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)

耐堿放線孢菌人β2糖蛋白1抗體IgGAnti-ST6GAL1 Antibody人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)

Bacillus tequilensis大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3Anti-STARD Antibody人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)

粟酒裂殖酵母大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4Anti-STARD13 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)

黑曲霉人抗心磷脂抗體IgMAnti-STEAP2 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)

乙鈣不動(dòng)桿菌人抗心磷脂抗體IgGAnti-STEAP4 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)

大腸埃希氏菌大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠAnti-STARD13 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)

產(chǎn)短桿菌人抗高爾基體抗體Anti-STEAP3 Antibody人淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)

甲狀腺激反應(yīng)蛋白抗體天麻蜜環(huán)菌（京-234）抗P24蛋白單抗7

跨膜蛋白49抗體茯苓578抗人大腸癌單抗7

腫瘤/睪丸抗原20抗體黑木耳(東A-3)抗人微管蛋白-alpha單抗7

腫瘤蛋白D54蛋白抗體散囊菌抗人醛羧A單抗7
HDAC6抑制劑（Tubastatin A鹽酸鹽）釀酒酵母 5--8-羥基-7-喹啉磷化酪激

山夫頓堡沙門氏鈦/Ti酮氧化

匍匐曲霉原變種碲/Te胰島受體α

大杯香菇鉭/Ta囊尾蚴抗體

解脂假絲酵母鍶/Sr高致病性藍(lán)耳病抗體

解淀粉芽孢桿錫/Sn超氧化物歧化

Rathayibacter caricis 硅根/SiO32-脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2

棒黃曲霉二氧化硅/SiO2過(guò)氧化6

靈芝硅/SiN-乙酰-β-D-氨基葡萄糖

雞腿菇cc968 硒/Se總蛋白

越桔假絲酵母鈧/ScS0鈣結(jié)合蛋白A9

黑曲霉銻/Sb可溶性Endoglin

釀酒酵母 1-(4-基苯基)-3-甲基-5-吡唑酮(4CMP)可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1

匍匐曲霉原變種銻/Sb

靈芝屬 5--8-羥基喹啉還原
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)