Aurora B抑制劑(AZD1152-HQPA)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10736

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Aurora B抑制劑(AZD1152-HQPA)

英文名稱：AZD1152-HQPA

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10736

產(chǎn)品介紹:

AZD1152-HQPA是一種高度選擇性的Aurora B抑制劑，IC50值為0.37nM，對Aurora B的選擇性是Aurora A的3700倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：722544-51-6

別名：Barasertib-HQPA;INH-34

純度：99.64%

分子量：507.56

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

普通變形桿菌胸腺β10抗原Anti-ENTPD1 Antibody人腫瘤特異性抗原(TSA)

羅氏菌屬新型血管活性因子UCN抗原(小鼠、大鼠)Anti-ENTPD1 Antibody人腫瘤特異性抗原(TSA)

耐冷冷桿菌上游激因子1抗原Anti-EOMES Antibody人黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)

孟氏假單胞菌泛蛋白Anti-EPG5 Antibody人黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)

pBiFC-VN173 (Plasmid #22010)兔抗血管抑制蛋白1抗原Anti-EPGN Antibody人癌易感蛋白2(BRCA-2)

植物乳桿菌血管內(nèi)皮粘附分子抗原Anti-EPB41L2 Antibody人癌易感蛋白2(BRCA-2)

施氏假單胞菌血管內(nèi)皮粘附分子抗原Anti-EPHB4 Antibody人凋亡信號調(diào)節(jié)激I(ASK-1)

Chelativorans電壓依賴性陰離子通道抗原Anti-EPHA6 Antibody人凋亡信號調(diào)節(jié)激I(ASK-1)

淺被黑蛋巢血管內(nèi)皮生長因子(多肽抗原)Anti-EPHB2 Antibody人凋亡信號調(diào)節(jié)激I(ASK-1)

唾液鏈球菌血管內(nèi)皮生長因子A抗原Anti-EPHB6 Antibody人凋亡信號調(diào)節(jié)激I(ASK-1)

嘴突凸臍蠕孢血管內(nèi)皮生長因子C型抗原Anti-EPHX3 Antibody人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

中國擬迷孔菌血管內(nèi)皮生長因子受體2Anti-EPN1 Antibody人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

總狀共頭霉可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2Anti-EPHX4 Antibody人轉(zhuǎn)移因子(TF)

副氧化微桿菌血管內(nèi)皮生長因子受體-3（多肽）Anti-EPN2 Antibody人轉(zhuǎn)移因子(TF)

三葉草根瘤菌血管內(nèi)皮生長因子受體-3抗原Anti-EPN3 Antibody人結(jié)腸癌抗原(CCA)

雙孢蘑菇血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原Anti-EPS8L2 Antibody人結(jié)腸癌抗原(CCA)

核轉(zhuǎn)錄因子抗體三線鐮孢菌人髓樣甲狀腺腫瘤細胞

轉(zhuǎn)錄因子SOX7抗體干酪乳桿菌人膽管細胞型肝癌細胞

卵子結(jié)合生成堿性螺旋蛋白抗體Naxibactervarians人髓母細胞瘤細胞

卵子結(jié)合生成堿性螺旋蛋白2抗體Lysinibacillusxylanilyticus人結(jié)直腸癌細胞
Aurora B抑制劑(AZD1152-HQPA)根瘤環(huán)丁烷甲一氧化氮合

玫煙色棒束孢 3-芐鹽鹽1,25-二羥基維生D3

Talaromyces sp. 4-氟苯硫D二聚體

鏈孢囊 4-氟αS1酪蛋白

酯香微桿 4-氟硫代苯甲γ干擾

帕氏食氫產(chǎn)水 2--1,3-二甲基化咪唑鎓白介1

新疆鹽地桿 5-甲氧基-2-巰基苯并咪唑白介10

漢遜德巴利酵母鹽洗必泰白介17

炭黑曲霉 2-氟-5-白介2

棕灰口蘑 2-苯基丁酰白介4

黑腐皮殼 4-氟-3-硝基三氟甲苯白介6

冷桿 2,4-二硝基-5-氟苯白介8

史氏芽孢桿 2,4-二氟表皮生長因子

斑玉蕈 4-溴-2-氟苯雌二

松口蘑 3-氟-4-甲氧基苯雌
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)