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貨號(hào)	FS-X10735

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：CDK7抑制劑(BS-181)

英文名稱：BS-181

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10735

產(chǎn)品介紹:

BS-181是一種高度選擇性的CDK7抑制劑，IC50值為21nM，對(duì)CDK7的選擇性是對(duì)CDK1，2，4，5，6和9的40多倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1092443-52-1

純度：99.72%

分子量：380.53

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

糞腸球菌腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2抗原Anti-ELOVL1 Antibody人腫瘤標(biāo)志物(CA724)

炭黑曲霉腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗原Anti-ELOVL1 Antibody人腫瘤標(biāo)志物(CA724)

釀酒酵母腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗原Anti-ELOVL4 Antibody明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)

黑曲霉腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡2配體抗原Anti-ELOVL3 Antibody明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)

三葉草根瘤菌端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗原Anti-ELOVL4 Antibody人非小肺癌抗原(LTA)

深紅酵母TRIM32抗原Anti-ELOVL5 Antibody人非小肺癌抗原(LTA)

褐囊蜜環(huán)菌原肌球蛋白抗原Anti-ELOVL6 Antibody人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)

秦氏蜜環(huán)菌生精凋亡相關(guān)基因4抗原Anti-ELP2 Antibody人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)

硬水黃桿菌CIDEB抗原Anti-ELOVL5 Antibody人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)

肉紅鐮孢Tsg101抗原Anti-EMX1 Antibody人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)

大腸埃希菌促甲狀腺受體抗原Anti-EMX1 Antibody人本周蛋白(BJP)

黑曲霉自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原Anti-EMB Antibody人本周蛋白(BJP)

密歇根鏈霉菌*肺癌腫瘤阻抑基因1抗原Anti-ENAH Antibody人癌胚鐵蛋白(CEF)

葡萄座腔菌甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1抗原Anti-EMX2 Antibody人癌胚鐵蛋白(CEF)

枯草芽孢桿菌枯草亞種微管蛋白-γ抗原Anti-ENO2 Antibody人鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)

短小芽孢桿菌TWIST蛋白抗原Anti-ENPP3 Antibody人鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)

轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體平展曲霉（曲霉平展變種）人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

分選連接蛋白5抗體裂殖壺菌人胰腺上皮樣癌細(xì)胞

分選連接蛋白2抗體意大利青霉人喉癌上皮細(xì)胞

分選連接蛋白7抗體指狀青霉人惡性黑色瘤瘤株
CDK7抑制劑(BS-181)*芽胞桿（Bacillus atrophaeus）ATCC 9372；（曾用名：枯草芽胞桿黑色變種） 1H-吡唑-4-甲甲殼質(zhì)蛋白40

炭黑曲霉 -2-甲乙酯高爾基體蛋白73

松生莖點(diǎn)霉 2-辛皮質(zhì)酮;腎上腺酮

長(zhǎng)雙歧桿 2,4,6-三嘧啶褪黑

鴨疫里氏桿 N-苯基雙(三氟磺亞)催產(chǎn)

畢赤酵母全氟丁基磺酰氟精加壓

耐冷冷桿 2-(甲氧基羰基)苯皮質(zhì)

香菇 2,2,2-三氟乙鹽鹽皮質(zhì)酮;腎上腺酮

膜醭假絲酵母二釕(II)二聚體III型膠原蛋白

咸海鮮芽孢桿 1,8-辛二Ⅳ型膠原

傳染性支氣管炎病 4-(氨基)吡啶Ⅲ型膠原

弗雷德里克斯堡假單胞 2-(氨甲基)吡啶脂肪合成

紫紅曲霉 2-氟吡啶α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

環(huán)形泰勒蟲（安西株） 3-氟吡啶膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白

中間根瘤屬 3-氟一氧化氮
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)