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貨號 | FS-X10563 |
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產(chǎn)品介紹:
Indoximod(D-1MT,NLG8189)是吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)通路的抑制劑,Ki值為19μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:110117-83-4 別名:NLG-8189;1-Methyl-D-tryptophan 純度:98.98% 分子量:218.25 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:IDO通路抑制劑(Indoximod)
英文名稱:Indoximod
產(chǎn)品規(guī)格:250mg
貨號:FS-X10563
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
大腸埃希氏桿菌鋅指蛋白198抗體Anti-NCR1 AntibodyⅫ(F12)
蠟樣芽孢桿菌鋅指蛋白323抗體Anti-NDC80 AntibodyⅪ(F11)
棱柱散尾菌中華變型鋅指蛋白206抗體Anti-NCX1(SLC8A1) AntibodyⅩⅢB肽(F13B)
植物乳桿菌緊密粘連蛋白ZO-3抗體Anti-NCSTN AntibodyⅩⅢA1肽(F13A1)
*美味牛肝菌鋅指蛋白ZBT10抗體Anti-NDP52/CALCOCO2 AntibodyⅩⅢ(F13)
枯草芽孢桿菌鋅指蛋白BED抗體Anti-NDRG1 AntibodyⅩ(F10)
產(chǎn)朊假絲酵母鋅指蛋白217抗體Anti-NDRG2 AntibodyⅨ(F9)
水棲黃桿菌鋅指蛋白575抗體Anti-NDRG3 AntibodyⅧ(F8)
直絲紫鏈霉菌鋅指蛋白X染色體蛋白抗體Anti-NDRG1 AntibodyⅦ(F7)
脂肪桿菌抑制蛋白4抗體Anti-NDRG2 AntibodyⅥ(F6)
季也蒙假絲酵母果生變種透明帶黏附蛋白ZAN抗體Anti-NDUFB2 AntibodyⅤ(F5)
西弗冠孢酵母鋅指蛋白437抗體Anti-NDUFB5 AntibodyⅡ(F2)
德氏乳桿菌鋅指蛋白415抗體Anti-NECTIN3 Antibody凝血/抗凝血復(fù)合體(TAT)
小單孢菌鋅指蛋白46抗體Anti-NDUFA1 Antibody凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)
鼠李糖乳桿菌鋅指蛋白93抗體Anti-NECTIN2 Antibody檸檬合(CS)
嗜乙酰乙棒桿菌鋅指蛋白568抗體Anti-NECTIN4 Antibody檸檬(Citrin)
泛特異性蛋白Otubain2抗體中間普氏菌(不提供)人支氣管成纖維細(xì)胞提取物
卵巢癌相關(guān)基因1抗體綠葉假單胞菌人支氣管上皮細(xì)胞提取物
氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長抑制因子1抗體紫芝(紫靈芝,中華靈芝)人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
結(jié)腸癌過度表達(dá)蛋白1抗體變色栓菌(云芝)(斜面)人肺動脈成纖維細(xì)胞提取物
IDO通路抑制劑(Indoximod)聚生殼 2--4--3-蛋白磷2A
土生類諾卡氏 2--4-吡啶巰基轉(zhuǎn)移
黑化鏈霉 2-氟-3--5-氟吡啶肌酐
辣椒枯萎 乙基三苯基溴化磷環(huán)磷鳥
海水芽胞桿 敵草凝血
栗疫 (基膦)金基質(zhì)金屬蛋白2
金灰青霉 Fmoc-N-甲基-L-天冬 4-叔丁酯凝血
鴨疫里氏桿 N-(5-氨基-2-基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶基質(zhì)金屬蛋白2
禽腺病Ⅵ型 碳酐
大球蓋菇 硫鉻,水合肺炎病抗體
根霉屬 十二羰基三釕基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1
亮白曲霉 化镥(III)六水合物, REacton基質(zhì)金屬蛋白9
曲霉 (s)-4-(4-氨基芐基)-1,3-唑烷-2-酮白介27
磚紅鐮刀 1,1,1,5,5,5-六氟戊烷-2,白介16
氏假單胞 4-MU-sulfate K *1 g* [4-Methylumbelliferyl sulfate鈣調(diào)蛋白
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