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貨號(hào)	FS-X10817

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II抑制劑（TAS-103雙鹽酸鹽）

英文名稱：TAS-103 dihydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10817

產(chǎn)品介紹:

TAS-103(BMS-247615)雙鹽酸鹽是拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II的抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：174634-09-4

別名：BMS-247615 dihydrochloride

純度：98.53%

分子量：406.31

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜麥芽黃單胞菌小鼠網(wǎng)膜Anti-OR14J1 Antibody人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)

被孢菌屬大鼠生長激釋放肽ghrelinAnti-OR1D5 Antibody人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)

孟氏假單胞菌人神經(jīng)營養(yǎng)因子3Anti-OR1D2 Antibody人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)

HIV假病 Z20-11人的神經(jīng)生長因子Anti-OR1B1 Antibody人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移(UGCG)

紡錘形賴芽孢桿菌小鼠孤腓肽Anti-OR1D5 Antibody人凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)

卷枝毛霉大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑Anti-OR1L6 Antibody人凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)

巨型艾美耳球蟲人的神經(jīng)生長因子-βAnti-OR1S2 Antibody人吡哆/吡哆維生B6激(PDXK)

谷棒桿菌人巨噬炎性蛋白3βAnti-OR1N1 Antibody人吡哆/吡哆維生B6激(PDXK)

草菇小鼠蛋白磷Anti-OR2A14 Antibody人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)

大鼠溴脫氧核Anti-OR1S2 Antibody人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)

銅綠假單胞菌大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2Anti-OR2A14 Antibody人血清/糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激2(GSK2)

構(gòu)巢曲霉人巨噬炎性蛋白3αAnti-OR2A1; Antibody人血清/糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激2(GSK2)

家園鬼傘小鼠硫氧還蛋白還原Anti-OR2A25 Antibody人絲裂原活化蛋白激激6(MKK6)

杏鮑菇小鼠硫氧化還原蛋白Anti-OR2A1; Antibody人絲裂原活化蛋白激激6(MKK6)

蘇云金芽孢桿菌大鼠色P4502E1Anti-OR2A25 Antibody人吡哆/吡哆維生B6磷(PDXP)

熱帶頭梗霉人巨噬炎性蛋白1βAnti-OR2A7 Antibody人吡哆/吡哆維生B6磷(PDXP)

原癌基因R-Ras抗體豬苓小鼠乳腺癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白133抗體紅菇屬恒河猴胚腎細(xì)胞

環(huán)指蛋白35抗體香灰菌（138）(無法提供）人膀胱癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白130抗體#金福菇小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞
拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II抑制劑（TAS-103雙鹽酸鹽）鼎湖鱗傘（只能確定到屬）麥康凱瓊脂2號(hào)色P45027B1

謝瓦曲霉纖維剛果紅培養(yǎng)基可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1

鴨瘟病抗血清姜氏培養(yǎng)基（不含瓊脂）可溶性FMS樣酪激1

草青霉姜氏瓊脂培養(yǎng)基游離甲狀腺

玫瑰產(chǎn)色鏈霉解磷細(xì)培養(yǎng)基（有機(jī)磷細(xì)培養(yǎng)基）游離狀腺原

光帽鱗傘固氮根瘤培養(yǎng)基可溶性CD44變體9

水稻節(jié)桿聯(lián)合固氮培養(yǎng)基Periostin蛋白

木霉固氮用阿須貝氏培養(yǎng)基X-框結(jié)合蛋白1

黃色雙孢放線無機(jī)磷細(xì)培養(yǎng)基肌依賴1α

節(jié)桿去氧膽鹽枸櫞鹽乳糖蔗糖瓊脂總膽汁

墳?zāi)构?jié)桿 Honda氏產(chǎn)肉湯尿

樟疫霉明膠蛋白胨肌酐

貴州青霉玉浸粉尿氮

芥黃蜜環(huán) MPC瓊脂培養(yǎng)基白介23

耐酪冢村接觸皿培養(yǎng)基白介22
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)