P-糖蛋白抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10733

產(chǎn)品介紹:

Tariquidar methanesulfonate，hydrate是一種有效的特異性P-glycoprotein(P-gp)抑制劑，Kd為5.1±0.9nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：625375-83-9

別名：XR9576

純度：98.02%

分子量：892.99

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：P-糖蛋白抑制劑

英文名稱：Tariquidar methanesulfonate, hydrate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10733

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

松杉靈芝信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)抗原Anti-EIF3D Antibody人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)

腐皮鐮孢信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗原Anti-EIF2B3 Antibody人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)

灰樹花（可訂購）斜面形式雌激硫轉(zhuǎn)移抗原Anti-EIF2S1 Antibody人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)

聚生殼菌類泛蛋白Anti-EIF3D Antibody人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)

孟氏假單胞菌磷化微管相關(guān)蛋白多肽Anti-EIF3E Antibody人胸腺白血病抗原(TLa)

葡萄座腔菌微管相關(guān)蛋白2抗原Anti-EIF3F Antibody人胸腺白血病抗原(TLa)

羅伊氏乳桿菌微管相關(guān)蛋白1A抗原Anti-EIF3J Antibody人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)

粉紅鉚釘菇新型抑癌基因(多肽)Anti-EIF3K Antibody人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)

黃孢平革菌轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗原Anti-EIF3K Antibody人足標記蛋白/足盂蛋白(PCX)

大腸埃希菌Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原Anti-EIF3K Antibody人足標記蛋白/足盂蛋白(PCX)

釀酒酵母固生蛋白抗原Anti-EIF3L Antibody人癌易感蛋白1(BRCA-1)

聚生殼菌內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液蛋白抗原Anti-EIF4A1 pAb人癌易感蛋白1(BRCA-1)

土生類諾卡氏菌三葉肽因子3(多肽)Anti-EIF4E Antibody人T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)

黑化鏈霉菌組織因子途徑抑制劑-2抗原Anti-EIF4EBP1 Antibody人T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)

辣椒枯萎TGF-β誘導早期應答基因1抗原Anti-EIF4B Antibody人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)

海水芽胞桿菌轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗原Anti-EIF4G1 Antibody人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)

泛樣蛋白Sumo2抗體黑曲霉人急性骨髓白血病細胞

泛樣蛋白Sumo3抗體曲霉大鼠滑膜細胞

骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體塔賓曲霉小鼠胚胎成纖維細胞

上皮鈉離子通道蛋白D/δENaC抗體宇佐美曲霉人胚肺成纖維細胞
P-糖蛋白抑制劑淺絳紅鏈霉 4--3,5-二硝基三氟甲苯CD4分子

節(jié)桿屬 2-氟-3-吡啶羧CD8分子

釀酒酵母鄰氟苯甲酰神經(jīng)營養(yǎng)因子3

平菇 4-硝基-3-三氟乙酰轉(zhuǎn)移

釀酒酵母 2-溴三氟甲苯γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽

放射形根瘤 2-氨基-5-苯甲脫氧吡啶;脫氧吡啶啉

炭疽芽孢桿 (-)-10-樟腦磺酰5α還原

玉黑粉異煙酰鹽鹽狂犬病糖蛋白

大腸埃希氏 4-氟吡啶鹽鹽狂犬核蛋白

浸麻類芽孢桿 2-叔丁酯尿蛋白

泡盛曲霉反-2-癸烯蛋白激A

畢赤酵母 2-噻吩乙酰半乳糖凝集3

枯草芽孢桿 2-賴氨酰氧化樣蛋白2

李色鏈霉甲氧基乙酰幾丁質(zhì)

根瘤屬 5-氟-8-羥基喹啉XIIa

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