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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> P-糖蛋白抑制劑
貨號(hào) | FS-X10733 |
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產(chǎn)品介紹:
Tariquidar methanesulfonate,hydrate是一種有效的特異性P-glycoprotein(P-gp)抑制劑,Kd為5.1±0.9nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):625375-83-9 別名:XR9576 純度:98.02% 分子量:892.99 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:P-糖蛋白抑制劑
英文名稱:Tariquidar methanesulfonate, hydrate
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10733
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
松杉靈芝信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)抗原Anti-EIF3D Antibody人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)
腐皮鐮孢信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗原Anti-EIF2B3 Antibody人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)
灰樹花(可訂購)斜面形式雌激硫轉(zhuǎn)移抗原Anti-EIF2S1 Antibody人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)
聚生殼菌類泛蛋白Anti-EIF3D Antibody人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)
孟氏假單胞菌磷化微管相關(guān)蛋白多肽Anti-EIF3E Antibody人胸腺白血病抗原(TLa)
葡萄座腔菌微管相關(guān)蛋白2抗原Anti-EIF3F Antibody人胸腺白血病抗原(TLa)
羅伊氏乳桿菌微管相關(guān)蛋白1A抗原Anti-EIF3J Antibody人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)
粉紅鉚釘菇新型抑癌基因(多肽)Anti-EIF3K Antibody人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)
黃孢平革菌轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗原Anti-EIF3K Antibody人足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)
大腸埃希菌Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原Anti-EIF3K Antibody人足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)
釀酒酵母固生蛋白抗原Anti-EIF3L Antibody人癌易感蛋白1(BRCA-1)
聚生殼菌內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液蛋白抗原Anti-EIF4A1 pAb人癌易感蛋白1(BRCA-1)
土生類諾卡氏菌三葉肽因子3(多肽)Anti-EIF4E Antibody人T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)
黑化鏈霉菌組織因子途徑抑制劑-2抗原Anti-EIF4EBP1 Antibody人T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)
辣椒枯萎TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗原Anti-EIF4B Antibody人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)
海水芽胞桿菌轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗原Anti-EIF4G1 Antibody人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)
泛樣蛋白Sumo2抗體黑曲霉人急性骨髓白血病細(xì)胞
泛樣蛋白Sumo3抗體曲霉大鼠滑膜細(xì)胞
骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體塔賓曲霉小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
上皮鈉離子通道蛋白D/δENaC抗體宇佐美曲霉人胚肺成纖維細(xì)胞
P-糖蛋白抑制劑淺絳紅鏈霉 4--3,5-二硝基三氟甲苯CD4分子
節(jié)桿屬 2-氟-3-吡啶羧CD8分子
釀酒酵母 鄰氟苯甲酰神經(jīng)營養(yǎng)因子3
平菇 4-硝基-3-三氟乙酰轉(zhuǎn)移
釀酒酵母 2-溴三氟甲苯γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽
放射形根瘤 2-氨基-5-苯甲脫氧吡啶;脫氧吡啶啉
炭疽芽孢桿 (-)-10-樟腦磺酰5α還原
玉黑粉 異煙酰鹽鹽狂犬病糖蛋白
大腸埃希氏 4-氟吡啶鹽鹽狂犬核蛋白
浸麻類芽孢桿 2-叔丁酯尿蛋白
泡盛曲霉 反-2-癸烯蛋白激A
畢赤酵母 2-噻吩乙酰半乳糖凝集3
枯草芽孢桿 2-賴氨酰氧化樣蛋白2
李色鏈霉 甲氧基乙酰幾丁質(zhì)
根瘤屬 5-氟-8-羥基喹啉XIIa
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